生物化學實驗教程（簡體書）

《普通高等教育“十二五”重點規劃教材．生命科學應用型系列教材：生物化學實驗教程》分四個部分，第一部分是實驗的基礎理論部分，包括生物化學須知、生物大分子提取與分離、分光光度法及比色分析法、電泳法技術、層析技術、離心技術、透析技術。第二部分以實驗為主體，闡述了常用的基礎實驗技術、綜合性實驗、設計性實驗。《普通高等教育“十二五”重點規劃教材．生命科學應用型系列教材：生物化學實驗教程》的目的是培養學生嚴謹的科學態度，獨立思維以及獨立完成實驗過程的能力。《普通高等教育“十二五”重點規劃教材．生命科學應用型系列教材：生物化學實驗教程》適用於高等院校的生物科學、生物技術、生物工程、動物科學、農業科學、園藝、食品科學等專業學生使用，也可供相關技術人員參考。．

《普通高等教育"十二五"重點規劃教材?生命科學應用型系列教材:生物化學實驗教程》適用于高等院校的生物科學、生物技術、生物工程、動物科學、農業科學、園藝、食品科學等專業學生使用，也可供相關技術人員參考。

第一部分 生物化學技術概論1 生物化學須知1.1 生物化學實驗技術發展簡史1.2 實驗室規則1.3 實驗室安全及防護知識1.4 實驗報告1.5 實驗室基本操作1.6 緩衝溶液與pH測定1.7 生化實驗室的基本設施與裝備2 生物大分子提取與分離2.1 實驗材料的處理2.2 生物材料處理的常用方法2.3 目的物分離與提取2.4 目的物的沉澱分離2.5 過濾與膜分離技術2.6 溶劑萃取法2.7 反膠束萃取2.8 超臨界（流體）萃取3 分光光度法及比色分析法3.1 原理3.2 分光光度計的構造3.3 7220型分光光度計4 電泳法4.1 電泳的基本原理4.2 影響電泳的主要因素4.3 區帶電泳的分類4.4 幾種常見的電泳方法5 層析技術5.1 層析技術概述5.2 凝膠層析5.3 離子交換層析5.4 親和層析5.5 具體的一些層析方法5.6 高效液相色譜6 離心技術6.1 基本原理．6.2 離心機的主要構造和類型6.3 離心技術的應用6.4 電動離心機的使用方法及注意事項7 透析7.1 膜7.2 溶劑7.3 物理條件7.4 董南（Donnan）膜平衡第二部分 生物化學實驗實驗1 生物化學基礎實驗實驗1.1 糖類的性質實驗（糖的顏色反應）實驗1.2 糖類的性質實驗（糖的還原作用）實驗1.3 總糖的測定——硫酸蒽酮法實驗1.4 血糖的定量測定實驗1.5 3，5-二硝基水楊酸比色法測定糖的含量實驗1.6 糖的薄層層析實驗1.7 粗脂肪的定量測定——索氏抽提法實驗1.8 脂肪酸的β-氧化實驗1.9 碘值的測定實驗1.10 酸價的測定實驗1.11 膽固醇的測定實驗1.12 卵磷脂的提取及鑒定實驗1.13 氨基酸的分離鑒定——紙層析法實驗1.14 氨基酸分離——雙向層析法實驗1.15 蛋白質的沉澱反應、顏色反應及等電點的測定實驗1.16 雙縮脲法測定蛋白質含量實驗1.17 Folin-酚法測定蛋白質含量實驗1.18 微量凱氏定氮法實驗1.19 SDS-PAGE測定蛋白質分子量實驗1.20 葡聚糖凝膠層析脫鹽實驗1.21 醋酸纖維素薄膜電泳分離血清蛋白實驗1.22 血清蛋白質聚丙烯醯胺凝膠電泳實驗1.23 考馬斯亮藍法測蛋白質濃度實驗1.24 紫外吸收法測定蛋白質含量實驗1.25 脲酶Km值簡易測定法……附錄主要參考文獻．

2.4.2.4 復合沉淀法
在溶液中加入某些物質，使它與蛋白質等形成復合物而沉淀下來，從而達到分離的方法，稱為復合沉淀法。分離出復合沉淀后，有的可以直接應用，如菠蘿蛋白酶用單寧沉淀法得到的單寧一菠蘿蛋白酶復合物，可以直接作為藥品，用于治療咽喉炎等。也可以再用適當的方法，使酶從復合物中析出，而進一步純化。
常用的復合沉淀劑有單寧、聚乙二醇、聚丙烯酸等高分子聚合物。
例如，以單寧為沉淀劑進行酶的復合沉淀，在操作時，先將酶溶液調節到一定的pH（不同的酶，應調節在不同的pH，一般控制在pH 4～7的范圍內），然后加入一定量的單寧（一般單寧的加入量，為酶溶液的0.1％～1％），生成酶一單寧復合物沉淀。分離出的酶一單寧復合物可以直接應用。如果要進一步純化，可將沉淀分離出來后，用乙醇或丙酮處理以除去單寧；也可以用pH8～11的碘酸鈉或硼酸鈉處理，使酶溶解出來，而單寧仍然為沉淀；還可以采用吐溫60（聚氧乙烯山梨糖醇硬脂酸酯）、吐溫80（聚氧乙烯山梨糖醇油酸酯）、分子量大于6000的PEG（聚乙二醇）或PVP（聚乙烯氮戊環酮）等大分子進行復分解反應。這些大分子聚合物可與單寧形成難溶于水的樹脂狀沉淀，而使酶游離出來。單寧復合沉淀法適用于各種來源的蛋白酶、淀粉酶、糖化酶、果膠酶、纖維素酶等的沉淀分離。
再如，聚丙烯酸也可以作為復合沉淀劑，用于酶的沉淀分離。在使用時，將酶液調節至pH 3～5，加入適量的聚丙烯酸（一般為酶蛋白量的30％～40％），生成酶一聚丙烯酸沉淀。進一步純化是將沉淀分離出來后，用稀堿液調節pH至6以上，則復合物中的酶與聚丙烯酸分開，再加入一定量的Ca2+、M92+、Al3+等金屬離子，與聚丙烯酸反應生成聚丙烯酸鹽沉淀，而使酶游離出來。分離得到的聚丙烯酸鹽沉淀，可以用1mol／L硫酸處理，回收聚丙烯酸循環使用。
2.4.2.5金屬鹽沉淀法
利用溶液中某種溶質與某些金屬離子反應，生成金屬鹽沉淀，而與其他組分分離的方法稱為金屬鹽沉淀法。常用的金屬鹽沉淀法有鈣鹽沉淀法、鉛鹽沉淀法等。
例如，在核酸的水提取液中，加入一定體積比（一般為10％左右）的10％氯化鈣溶液，使DNA和RNA均形成鈣鹽，再加入1／5體積的乙醇，DNA—Ca即沉淀析出。
再如，在含有倍半萜的乙醇抽提液中，加入4％的乙酸鉛溶液，減壓除去乙醇，即可得到倍半萜的鉛鹽沉淀。脫鉛的方法通常是通人硫化氫氣體，生成溶解度更小的硫化鉛，而得到倍半萜。