細胞生物學與細胞工程實驗指導（簡體書）

細胞生物學是迅猛發展的生命科學的重要基礎學科，有關細胞的基礎知識-和相關研究是現代生命科學發展的重要支柱之一。在它的內容中處處體現著與現代生物學各分支學科的交叉與整合。細胞生物學是高等學校生物科學類、醫學類各專業的基礎課程之一，是一門實驗性很強的學科。生命科學與醫學的許多重大發現與細胞生物學實驗技術的不斷創新、發展是分不開的。實驗是科學理論的實踐，通過實驗可以鞏固和加深對細胞生物學知識和理論的理解，同時可獲得感性認識。學生在實驗中既可接受一定的細胞生物學基本實驗技能的訓練，又培養了實事求是的科學態度和獨立工作能力，從而可以掌握觀察問題和分析解決問題的方法，為生命科學與醫學的后續課程學習打下堅實的基礎。

細胞生物學是迅猛發展的生命科學的重要基礎學科，有關細胞的基礎知識-和相關研究是現代生命科學發展的重要支柱之一。在它的內容中處處體現著與現代生物學各分支學科的交叉與整合。細胞生物學是高等學校生物科學類、醫學類各專業的基礎課程之一，是一門實驗性很強的學科。生命科學與醫學的許多重大發現與細胞生物學實驗技術的不斷創新、發展是分不開的。實驗是科學理論的實踐，通過實驗可以鞏固和加深對細胞生物學知識和理論的理解，同時可獲得感性認識。學生在實驗中既可接受一定的細胞生物學基本實驗技能的訓練，又培養了實事求是的科學態度和獨立工作能力，從而可以掌握觀察問題和分析解決問題的方法，為生命科學與醫學的后續課程學習打下堅實的基礎。
本書是編者們根據多年的教學經驗和大量參考國內外相關資料編寫而成。鑒于此書是生物科學類、醫學類本科學生的專業基礎課教材，同時也考慮到又能作為相關人員的參考書，因此，本書的編寫，既考慮教材的基礎性與實用性，又考慮到其內容具有一定的科學性和先進性。本書實驗內容涉及顯微鏡技術、細胞的形態結構、細胞化學、細胞分裂、細胞培養技術、細胞化學成分的分離、植物細胞工程、動物細胞工程、染色體工程、胚胎工程等。根據教學的需要，有些實驗內容具有一定的綜合性和設計性。
本書供綜合大學、師范院校、醫科院校及農、林院校細胞生物學實驗教學之用，部分內容可作為細胞工程實驗教學之用。由T-~+學校和各個專業的教學要求和具體條件有所差別，使用本教材時，各學校可以根據具體條件自由選擇，靈活掌握。
雖然編者為本書的編寫做了很大努力，但限于業務水平和工作經驗，書中難免還存在缺點和不足。為此深切盼望讀者在使用本書的過程中能夠提出批評和建議。

細胞生物學與細胞工程實驗室規則
實驗一 普通光學顯微鏡的構造與使用
實驗二 特殊顯微鏡的原理和使用
實驗三 光學顯微標本的制作技術
實驗四 生物繪圖法
實驗五 細胞的基本形態與結構
實驗六 細胞的化學成分
實驗七 線粒體和液泡系的超活染色與觀察
實驗八 葉綠體的分離與熒光觀察
實驗九 線粒體的分離與觀察
實驗十 細胞器的分離
實驗十一 細胞有絲分裂
實驗十二 生殖細胞減數分裂
實驗十三 動物染色體標本的制備與觀察
實驗十四 染色體核仁組織區的銀染色法
實驗十五 動物細胞培養一原代細胞培養
實驗十六 動物細胞培養--傳代細胞培養
實驗十七 動物細胞的凍存、復蘇與運輸
實驗十八 雞血細胞的體外融合
實驗十九 細胞電融合
實驗二十 膜蛋白質的分離
實驗二十一 脂質體的制備
實驗二十二 凋亡細胞的生化分析
實驗二十三 誘變物質的微核測試
實驗二十四 細胞電泳
實驗二十五 植物組織培養基的配制與滅菌
實驗二十六 愈傷組織誘導和器官發生
實驗二十七 植物器官型快速繁殖培養
實驗二十八 植物器官培養技術
實驗二十九 花藥培養及花粉發育時期的鑒定
參考文獻

實驗三光學顯微標本的制作技術
一、實驗目的
了解光學顯微鏡切片制作技術的基本方法、步驟。
二、實驗原理
采用光學顯微鏡研究一般生物體的內部結構，在自然狀態下是無法觀察清楚的，多數動、植物材料都必須經過某種處理，將組織分離成單個細胞或薄片，光線才能通過細胞。為了適應這個需要，就產生了光學顯微鏡制片技術。
光學顯微鏡的制片技術方法可分為兩大類：一類是非切片法；另一類是切片法。
非切片法，是用物理或化學的方法，使細胞彼此分離，如有分離法、涂布法、壓碎法等。非切片法的操作比較簡單，能保持細胞的完整，但是細胞之間的正常位置往往被更動，無法反映細胞之間的正常聯系。它可以與切片法配合使用，各取其長處。
切片法，是利用銳利的刀具將組織切成極薄的片層，材料須經過一系列特殊的處理，如同定、脫水、包埋、切片、染色等，過程十分繁復。在制作過程中，還要經過一系列的物理和化學的處理，這些處理方法可根據各種不同材料的性質要求進行合理選擇。切片法雖然工序煩瑣，技術復雜，但是，它最能保持細胞間的正常的相互關系，能較好和較長時間地保留細胞的原貌，所以仍然是光學顯微鏡的主要制片方法。
三、實驗儀器、材料和試劑
1．儀器、用具
石蠟切片機、恒溫蠟箱、載玻片、蓋玻片。
2．材料
洋蔥根或小鼠肝。
3．試劑
乙醚、無水乙醇、甲醛、冰醋酸、苦味酸、重鉻酸鉀、鋨酸、正丁醇、二甲
苯、石蠟、甘油、雞蛋、紗布、加拿大樹膠、麝香草酚。
四、方法與步驟
光學顯微鏡切片制作技術最簡單的切片法是徒手切片，但是由于組織塊往往十分柔軟，切削很困難，而且無法得到十分薄的切片，因此必須先用某些特殊物質滲入組織塊的內部起支持作用，并將整個組織塊包住，然后再用精密的切片機制作切片，才能獲得良好的效果。這種方法稱為包埋法，包埋的物質稱為包埋劑。常用的包埋劑有石蠟、火棉膠、炭蠟、明膠等，水和塑料也可作為包埋劑。根據包埋劑的不同，分別有石蠟切片、火棉膠切片、冰凍切片等，它們各有長處，可以根據需要選用，但是使用得最多的還是石蠟切片技術。
石蠟作為包埋劑，有其獨特的優點，例如：石蠟能切出極薄的蠟片（2～10μm），切片時能連成蠟帶，便于制作連續切片；操作較容易，組織塊可以包埋在石蠟中長期保存。然而石蠟切片的制作過程較長，步驟很多，一步不慎往往導致前功盡棄，而且這些處理引起組織塊或多或少地收縮，切片時受濕度影響比較大，這些不足之處必須在制片過程中認真對待，盡量減小它的不良影響。
石蠟切片的制作過程主要包括：取材、同定、脫水、透蠟、包埋、切片、貼片、染色、透明、封藏等步驟。
1．取材
材料的好壞直接影響到切片的質量，無論取哪一種動植物材料，以下幾點是必須注意的。
（1）植物材料選擇時需盡可能不損傷植物體或所需要的部分；動物材料取用時常對動物施以麻醉，常用的麻醉劑有氯仿和乙醚，或將動物殺死后迅速取出所需要的組織。
（2）取材必須新鮮，這一點對于從事細胞生物學研究尤為重要，應盡可能割取生活著的組織塊，并隨即投人固定液。
（3）切取材料時刀要銳利，避免因擠壓細胞使其受到損傷。
（4）切取的材料應該小而薄，便于固定劑迅速滲入內部。一般厚度不超過2mm，大小不超過5mm×5ram。
2．同定
組織和細胞離開機體后，在一定時間內仍然延續著生命活動，會引起病理變化直至歸于死亡。為了使標本能反映它生前的正常狀態，必須盡早地用某些化學藥品迅速地殺死組織和細胞，阻抑上述變化，并將結構成分轉化為不溶性物質，防止某些結構的溶化和消失。這種處理就是同定。除了上述作用外，固定劑會使組織適當硬化以便于隨后的處理，還會改變細胞內部的折射系數并使某些部分易于染色。
固定劑的作用對象主要是蛋白質，至于其他成分如脂肪和糖，在一般制作時不加考慮，如要觀察這些物質，可用特殊的方法將其同定下來。
同定劑的作用表現在對材料體積的改變、硬化的程度、穿透的速度以及對染色的影響等方面。這些作用的好壞、大小，都依所同定的材料性質而定，同樣一種固定液對某一材料來說是良好的，但對另外一些組織可能就不很適用。良好的固定劑必須具備的特征是：穿透組織的速度快，能將細胞中的內含物凝同成不溶解物質，不使組織膨脹或收縮以保持原形，硬化組織的程度適中，增加細胞內含物的折光度，增加媒染和染色能力，具有保存劑作用。
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