動物細胞培養技術（簡體書）

本書詳細介紹了動物細胞培養技術中培養液與培養基、培養設備設施、原代細胞培養技術、細胞建系和船代培養技術、動物細胞的凍存和復蘇及污染檢測、細胞融合與單克隆抗體技術等內容。本書以動物細胞培養工作流程為導向，以學生綜合能力培養為本位，以實踐性、應用性為特色，將實驗準備、細胞培養、細胞研究融為一體，充分體現技能培養的特色。本書可作為生物技術、生物製藥、動物醫學、動物科學以及醫學類本科生、專科生實驗時的參考教材，同時也可作為組織與細胞培養相關領域研究人員的指導資料。

史利軍，中國農業科學院北京畜牧獸醫研究所，副研究員，預防獸醫學專業博士，多年來一直從事分子病毒與分子免疫相關的研究工作。目前，主持課題5項，包括國家重點研發項目、合作開發轉化項目、中央級公益性科研院所基金項目、“948”項目等。課題名稱如“貓泛白細胞減少症新型生物治療制劑的研發”“犬冠狀病毒病原膠體金檢測試紙條的聯合研發”“貓泛白細胞減少症病原膠體金檢測試紙條的聯合研發”“犬細小病毒治療性免疫球蛋白的研究”等。近年發表SCI文章10篇，發表中文核心以上科研論文55篇。以主編身份出版著作11本，副主編3本。通過課題的實施與開展，熟悉多種動物病毒的培養特性和相應細胞的培養要求，在動物細胞培養方面積累了很多的經驗。

1.以動物細胞培養工作流程為導向，培養學生綜合實驗能力；2.以實踐性、應用性為特色，將實驗準備、細胞培養、細胞研究融為一體，充分體現技能培養的特色；3.讀者覆蓋面廣，可作為生物技術、生物製藥、動物醫學、動物科學以及醫學類本科生、專科生的實驗參考教材，也可作為組織與細胞培養相關領域研究人員的指導資料。

組織細胞培養技術是現代生物技術的重要組成部分，已成為從事生命科學相關研究工作的一項基本技能。組織細胞培養技術是從動物體或人體內取出細胞或者組織，通過分散處理，模擬體內生理環境，在無菌、適溫和豐富的營養條件下，讓其在體外的培養瓶、培養基或大規模細胞培養反應器中繼續生長和增殖的一門技術。

本書的編寫目的是通過以動物細胞培養工作流程為導向，以綜合能力培養為本位，以實踐性、應用性為特色，將實驗準備、細胞培養、細胞研究融為一體，充分體現技能培養的特色，為今後從事細胞培養相關的工作打下扎實的實驗基礎。本書可作為從事生物技術、生物製藥、醫療器械生物學評價、動物醫學、動物科學實驗人員以及醫學類本科生、專科生實驗時的參考教材，同時也可作為組織與細胞培養相關領域研究人員的參考用書。

參加本書編寫的人員來自以下單位：中國農業科學院北京畜牧獸醫研究所（史利軍、崔尚金、袁維峰、秦彤、張廣智），北京通和立泰生物科技有限公司（李英俊、孫立旦、呂彥鋒、劉美、楊飛霞、張朋輝、張志慧、張迪、王紹雄、王鵬杰、梁麗娜、白洪旭），甘肅農業大學（包世俊），內蒙古民族大學（劉鍇、崔一龍），西藏職業技術學院（金紅巖、顧慶云、王俊書、徐進強），中國農業科學院農產品加工研究所（李淑英），軍事醫學研究院衛生勤務與血液研究所（尹惠瓊）。

本書編寫過程中得到了軍事醫學研究院方厚華教授和北京城市學院張亞蘭教授的悉心指導，提出了誠懇的修改意見並審定了全書，在此表示誠摯的謝意。

本書出版得到了北京市科技計劃課題“醫療器械研發與一致性評價公共服務平臺（Z191100005619015）”，中關村國家自主創新示範區高精尖產業協同創新平臺建設項目“醫療器械動物實驗科技平臺”，國家重點研發計劃“寵物病毒性傳染病新型生物治療制劑研究與產品創制（2016YFD0501000）”經費的資助。

由於水平有限，書中難免有不足及不妥之處，懇請讀者不吝指正。



編者

2020年8月

章緒論001

節動物細胞培養發展簡史001

第二節細胞培養的特點與應用003

一、細胞培養的特點003

二、細胞培養技術的應用研究005

第三節細胞培養生物學008

一、體外培養細胞與體內細胞的差異與分化008

二、體外培養細胞的類型009

三、體外培養細胞的生長與增殖過程012

四、細胞周期017

第四節細胞培養條件與影響因素020

一、無菌環境020

二、細胞分離方法021

三、細胞培養溫度022

四、細胞培養基的成分022

五、接種密度023

六、培養基的pH值024

七、細胞的凍存與復蘇024

八、附著底物025

九、細胞供體年齡027



第二章培養用液與培養基028

節培養基的基本性質028

一、營養成分028

二、pH值030

三、滲透壓030

四、緩衝能力030

五、促生長因子及激素031

六、無毒、無污染031

第二節水和平衡鹽溶液032

一、水032

二、平衡鹽溶液032

第三節天然培養基034

一、血清034

二、血漿039

三、雞胚浸出液040

四、水解乳蛋白041

五、膠原042

第四節合成培養基043

一、基本組分043

二、常用細胞培養基046

第五節細胞培養其它常用液053

一、平衡鹽溶液（Balanced salt solution，BSS）053

二、消化液053

三、pH調整液055

四、抗生素055

五、谷氨酰胺補充液056

六、二肽谷氨酰胺（L-丙氨酰-L-谷氨酰胺）056



第三章培養用設施與設備處理057

節細胞培養實驗室057

一、無菌操作區058

二、孵育區062

三、制備區062

四、儲藏區062

五、清洗和消毒滅菌區062

第二節細胞培養用儀器及設備062

一、CO2培養箱063

二、超凈工作臺/生物安全柜063

三、純水系統063

四、細胞冷凍儲存器064

五、冰箱065

六、恒溫水浴065

七、離心機066

八、顯微鏡066

九、高壓蒸汽滅菌器066

十、電熱烘幹箱067

十一、特殊設備067

第三節細胞培養用器械及器皿068

第四節培養用品的處理071

一、培養用品的清洗071

二、包裝075

三、消毒滅菌076

四、消毒方法的選擇081



第四章原代細胞培養技術083

節原代培養基本知識083

一、原代細胞的分離方法084

二、原代細胞的純化方法086

三、原代細胞培養086

四、原代細胞的生物學鑒定086

五、注意事項087

第二節上皮組織細胞的培養089

一、試劑與器材090

二、原代細胞的分離和純化090

三、腸上皮細胞的鑒定092

四、注意事項093

第三節結締組織細胞的培養094

一、疏松結締組織095

二、致密結締組織095

三、脂肪組織095

四、網狀組織096

五、雞成纖維細胞的原代培養096

第四節肌組織細胞的培養100

一、骨骼肌100

二、平滑肌101

三、心肌101

四、骨骼肌衛星細胞的培養101

第五節神經組織細胞的培養104

一、神經細胞的原代培養105

二、神經細胞組織的培養105

三、神經細胞原代培養的意義108

第六節幹細胞的培養109

一、幹細胞的分類109

二、胚胎幹細胞的培養110

三、成體幹細胞的培養114



第五章細胞建系、傳代培養技術118

節正常細胞系的建立和鑒定118

一、細胞系的建立118

二、細胞系的鑒定119

第二節癌細胞系的建立和鑒定121

一、細胞系的建立121

二、細胞系的鑒定122

第三節傳代培養基本知識122

一、傳代培養的過程124

二、Vero細胞的培養128

三、HeLa細胞的培養131

第四節傳代細胞的大規模培養133

一、懸浮規模培養134

二、單層規模培養134

三、動物細胞大規模培養的方法135

四、動物大規模培養技術的應用144

五、動物細胞生物反應器145

六、大規模培養技術的操作方式149



第六章動物細胞的凍存、復蘇及污染檢測157

節動物細胞凍存157

一、凍存的必要性157

二、冷凍保存的原理158

三、影響凍存細胞活性的因素159

四、細胞凍存方法162

第二節動物細胞復蘇167

一、細胞復蘇的原理167

二、細胞復蘇的方法168

三、細胞復蘇的要點169

第三節細胞培養污染檢測170

一、可見微生物污染檢測170

二、支原體檢測171

三、病毒污染檢測171



第七章細胞融合與單克隆抗體技術173

節單克隆抗體的概念173

第二節雜交瘤技術的誕生174

第三節單克隆抗體的制備176

一、動物免疫177

二、細胞融合180

三、雜交瘤細胞篩選186

四、雜交瘤細胞的克隆化197

五、雜交瘤細胞的凍存與復蘇199

六、單抗特性的鑒定201

第四節單克隆抗體的生產208

一、動物體內生產單抗的方法208

二、體外培養生產單抗的方法209

三、雜交瘤細胞的無血清培養211

第五節單克隆抗體的純化212

一、腹水型單抗的純化212

二、單抗的粗提213

第六節單克隆抗體的標記215

一、酶標記215

二、熒光素標記219

三、同位素標記220

四、生物素標記222

五、其它標記技術223



附錄224

一、常用的動物細胞系224

二、細胞培養常用術語228

三、細胞培養常用縮寫詞237

四、常用培養基成分和配方239

五、細胞計數（臺盼藍細胞染色計數）248

六、細胞生長曲線的繪製250



參考文獻253