PCR最新技術原理、方法及應用(第二版)（簡體書）

本書第一版出版以來，受到讀者的歡迎。在第一版面世的五年多時間里，隨著生命科學研究的深入，又衍生出了一些新的方法。第二版旨在及時地把這些方法介紹給讀者。本版新增的內容較多，主要包括： 詳細地介紹了芯片PCR、電子PCR和數字PCR及其應用； 增加和豐富了PCR在各領域中的應用； 對一些重要的PCR方法，諸如致突變PCR、免疫PCR、實時熒光定量PCR和PCR在法醫學中的應用等章節進行補充更新。
本書是一本關於PCR技術的實驗手冊，適用與所有從事生命科學研究的科技工作者、教師和研究生閱讀參考。

第一章 緒論1
第一節 PCR發展簡史1
第二節 PCR技術的基本原理和操作2
一、PCR的基本原理2
二、PCR的基本成分2
三、PCR的基本操作3
第三節 PCR的主要應用4
一、基礎研究方面的應用4
二、臨床上的應用5
三、法醫學中的應用6
四、其它方面的研究6
本章參考文獻7

第二章 擴增已知序列兩側DNA的PCR8
第一節 反向PCR8
一、引言8
二、基本原理8
三、材料8
四、方法9
五、注意事項10
六、應用11
七、小結13
參考文獻13
第二節 錨定PCR13
一、引言13
二、原理14
三、用連接錨定PCR從基因文庫中擴增已知基因側翼序列15
四、用互補錨定PCR直接擴增已知序列側翼cDNA序列16
五、問題及對策19
六、小結20
參考文獻21
第三節 RACEcDNA末端的快速擴增21
一、引言21
二、RACE基本原理22
三、實驗方案23
四、RACE的應用26
五、小結26
參考文獻26
第四節 連接介導的PCR27
一、引言27
二、原理27
三、材料27
四、操作步驟28
五、注意事項30
六、應用31
七、小結33
參考文獻33
第五節 BubblePCR34
一、引言34
二、原理34
三、材料與方法35
四、注意事項36
五、應用36
六、小結37
參考文獻37

第三章 巢式PCR38
第一節 常規巢式PCR38
一、引言38
二、原理38
三、材料38
四、方法39
五、注意事項39
六、應用與小結39
參考文獻40
第二節 半巢式PCR40
一、引言40
二、材料40
三、方法40
四、注意事項41
五、應用與小結41
參考文獻41
第三節 反轉錄巢式PCR41
一、引言41
二、材料41
三、方法42
四、注意事項43
五、應用43
參考文獻43
第四節 共有序列巢式PCR43
一、引言43
二、材料43
三、方法44
四、注意事項44
五、應用與小結44
參考文獻45
第五節 種特異巢式PCR45
一、引言45
二、材料45
三、方法45
四、注意事項46
五、應用與小結46
參考文獻47
第六節 巢式PCR變性梯度凝膠電泳47
一、引言47
二、材料47
三、方法47
四、注意事項48
五、應用與小結49
參考文獻49
第七節 巢式PCR限制性片段長度多態性49
一、引言49
二、材料49
三、方法50
四、注意事項51
五、應用與小結51
參考文獻51

第四章 實時熒光定量PCR52
第一節 實時熒光定量PCR原理52
一、引言52
二、概念及原理52
第二節 實時熒光定量PCR中的熒光化學物質54
一、引言54
二、熒光染料54
三、水解探針54
四、分子信標55
五、雙雜交探針56
六、復合探針57
第三節 實時熒光定量PCR的定量方法57
一、絕對定量57
二、相對定量58
第四節 實時熒光定量PCR的實驗方法60
一、實時定量PCR61
二、實時定量RTPCR63
三、實驗方案的優化65
四、實踐中應該注意的問題67
第五節 實時熒光定量PCR技術的應用68
一、在病原體檢測中的應用68
二、在腫瘤研究中的應用69
三、在基因表達研究中的應用70
四、在細胞因子表達分析中的應用70
五、在遺傳學及SNP分析上的應用71
本章小結71
本章參考文獻72

第五章 致突變PCR74
第一節 隨機錯誤摻入PCR構建突變體庫74
一、引言74
二、原理75
三、材料與方法75
四、注意事項75
五、討論76
六、應用76
第二節 PCR構建定點突變序列或重組序列77
一、引言77
二、實驗方案77
方案1重疊延伸PCR77
方案2大引物PCR79
方案3重組PCR80
方案4環狀質粒PCR82
三、注意事項84
四、討論84
五、應用85
六、小結86
本章參考文獻86

第六章 測序和DNA合成PCR87
第一節 不對稱PCR87
一、引言87
二、引物濃度不對稱PCR87
三、熱（引物長度）不對稱PCR89
四、應用92
五、小結93
參考文獻93
第二節 PCR測序法94
一、直接測序法94
二、循環測序法95
三、全自動DNA測序法96
四、應用97
參考文獻97
第三節 乳化液PCR97
一、引言97
二、原理97
三、材料和方法98
四、應用105
五、小結105
參考文獻105
第四節 基於PCR的大片段DNA的合成106
一、引言106
二、基本原理106
三、目的序列、寡核苷酸和測序引物的設計106
四、操作步驟108
五、DNA合成時常出現的問題及解決辦法111
六、小結112
參考文獻112

第七章 免疫PCR114
第一節 immunoPCR114
一、引言114
二、基本原理114
三、材料和試劑116
四、方法116
五、注意事項121
六、應用121
七、小結122
參考文獻122
第二節 免疫捕捉PCR123
一、引言123
二、基本原理124
三、材料124
四、方法124
五、注意事項126
六、應用127
七、小結128
參考文獻129
第三節 PCRELISA130
一、引言130
二、原理130
三、材料131
四、方法131
五、注意事項132
六、應用132
七、小結134
參考文獻135
第四節 原位PCR135
一、引言135
二、基本原理135
三、原位PCR方法分類及其設計方案136
四、原位PCR基本步驟138
五、原位PCR方法的選擇139
六、原位PCR操作注意事項140
七、原位PCR存在的問題和結果分析141
八、原位PCR的應用142
九、原位PCR操作程序示例142
十、小結144
參考文獻145

第八章 PCR芯片146
第一節 PCR芯片的結構及其工作原理146
一、引言146
二、原理146
三、方法149
四、應用149
五、小結149
參考文獻150
第二節 納升高通量PCR150
一、引言150
二、原理150
三、材料151
四、實驗方法151
五、注意事項151
六、應用152
七、小結152
參考文獻152
第三節 微流控PCR152
一、引言152
二、原理153
三、材料153
四、方法154
五、應用154
六、小結154
參考文獻154
第四節 連續流熱梯度PCR154
一、引言154
二、原理155
三、材料155
四、操作方法155
五、注意事項155
六、應用156
七、小結156
參考文獻156
第五節 PCR芯片的應用156
一、引言156
二、應用157
三、注意事項158
四、小結159
參考文獻159

第九章 電子PCR和數字化PCR160
第一節 電子PCR160
一、引言160
二、ePCR概念160
三、ePCR的基本原理161
四、與ePCR相關的數據庫162
五、ePCR的使用方法162
六、應用165
七、致謝168
參考文獻168
第二節 數字PCR和微流體數字PCR
技術169
一、引言169
二、數字PCR的原理170
三、數字PCR的操作及應用170
四、微流體數字PCR173
參考文獻177

第十章 其它PCR方法179
第一節 高(G＋C)含量DNA的PCR擴增179
一、使用增強劑改善高(G＋C)含量DNA模板的PCR擴增179
二、NaOH對模板進行預處理改善高(G+C)含量DNA的PCR擴增182
三、利用高溫PCR體系改善高(G+C)含量DNA模板的PCR擴增183
四、應用183
五、小結184
參考文獻184
第二節 長片段PCR185
一、引言185
二、原理185
三、材料185
四、方法186
五、注意事項187
六、應用189
七、小結190
參考文獻191
第三節 利用熱激活引物進行熱啟動PCR191
一、引言191
二、原理191
三、材料192
四、方法192
五、注意事項194
六、應用194
七、小結196
參考文獻197
第四節 融合PCR197
一、引言197
二、融合PCR的原理197
三、應用于基因插入的融合PCR的具體操作步驟198
四、融合PCR的應用198
五、融合PCR操作方法的注意事項201
六、小結202
參考文獻202
第五節 不依賴連接反應的克隆PCR203
一、引言203
二、基本原理203
三、材料204
四、方法204
五、注意事項206
六、應用206
參考文獻207
第六節 菌落PCR208
一、引言208
二、原理208
三、材料208
四、操作方法208
五、注意事項209
六、應用209
七、小結209
參考文獻209

第十一章 PCR在基因分型中的應用210
第一節 任意引物PCR210
一、引言210
二、任意引物PCR的基本原理及技術特點210
三、APPCR方法210
四、RAPPCR方法211
五、注意事項212
六、應用213
七、小結216
參考文獻216
第二節 通用PCR217
一、引言217
二、原理217
三、材料217
四、方法217
五、注意事項219
六、應用219
七、小結220
參考文獻220
第三節 repPCR221
一、引言221
二、基本原理221
三、材料221
四、方法223
五、注意事項224
六、應用225
七、小結226
參考文獻227
第四節 序列特異性引物PCR227
一、引言227
二、原理228
三、材料228
四、方法228
五、注意事項230
六、應用與小結231
參考文獻231
第五節 簡單序列重復區間PCR231
一、引言231
二、原理231
三、材料232
四、方法232
五、注意事項233
六、應用233
七、小結234
參考文獻234
第六節 鉗制PCR235
一、引言235
二、原理235
三、材料235
四、方法236
五、注意事項236
六、應用236
參考文獻236
第七節 序列特異性寡核苷酸多態性PCR237
一、原理237
二、試劑237
三、方法238
四、注意事項241
五、應用242
參考文獻242

第十二章 PCR在臨床診斷及流行病調查中的應用243
第一節 表位特異ＰＣＲ243
一、引言243
二、原理243
三、材料243
四、方法243
五、應用244
六、小結244
參考文獻244
第二節 雙標記PCR245
一、引言245
二、原理245
三、材料245
四、方法245
五、應用245
六、注意事項245
參考文獻246
第三節 降落PCR246
一、引言246
二、原理246
三、材料246
四、方法246
五、降落PCR與常規PCR的比較247
六、應用248
七、小結249
參考文獻249
第四節 16SrRNAPCR250
一、引言250
二、原理250
三、材料及設備251
四、方法251
五、注意事項252
六、應用252
七、小結253
參考文獻254
第五節 PCR偶聯連接酶鏈式反應255
一、原理255
二、材料255
三、方法255
四、注意事項257
五、應用258
參考文獻259
第六節 快速PCR259
一、引言259
二、原理259
三、材料260
四、方法260
五、注意事項264
六、小結266
參考文獻266
第七節 稀有限制性位點PCR267
一、引言267
二、原理267
三、材料267
四、方法269
五、注意事項270
六、應用270
七、小結271
參考文獻271

第十三章 PCR在法醫學中的應用273
第一節 小衛星可變重復序列PCR273
一、引言273
二、原理273
三、方法274
四、應用277
五、小結278
參考文獻279
第二節 短串聯重復序列的PCR280
一、引言280
二、原理280
三、材料281
四、方法282
五、注意事項286
六、應用286
七、小結288
參考文獻288
第三節 單核甘酸多態性PCR289
一、引言289
二、原理289
三、材料及方法292
四、SNPPCR檢測方法293
五、數據庫295
六、應用296
七、小結298
參考文獻298
第四節 全基因組PCR300
一、引言300
二、全基因組PCR的種類300
三、基因組DNA模板的制備304
四、不同WGA方法的比較305
五、WGA的產物分析及應用305
六、小結307
參考文獻308
第五節 單分子PCR309
一、引言309
二、原理309
三、材料309
四、方法309
五、注意事項310
六、SMPCR的應用310
七、小結311
參考文獻311

第十四章 PCR在遺傳病診斷中的應用312
第一節 多重PCR312
一、引言312
二、原理312
三、材料313
四、方法313
五、常見問題的解決316
六、應用317
七、小結322
參考文獻322
第二節 常用的等位基因特異性PCR325
一、引言325
二、原理325
三、材料325
四、方法325
五、注意事項327
六、對等位基因特異PCR的改進327
七、應用與小結328
參考文獻329
第三節 簡單等位基因辨別PCR329
一、引言329
二、原理329
三、材料331
四、方法331
五、注意事項331
六、應用與小結332
參考文獻332
第四節 LDNA標記的等位基因特異性PCR332
一、引言332
二、原理332
三、材料332
四、方法333
五、注意事項334
六、應用與小結334
參考文獻334
第五節 同源一步熒光等位基因特異性PCR334
一、引言334
二、原理335
三、材料335
四、方法335
五、注意事項337
六、應用與小結337
參考文獻337
第六節 低溫變性共擴增PCR337
一、引言337
二、原理338
三、材料339
四、方法339
五、小結339
參考文獻339
第七節 限制性片段長度多態性PCR340
一、原理340
二、材料341
三、操作方法341
四、注意事項342
五、應用342
參考文獻343
第八節 PCR變性梯度凝膠電泳343
一、原理343
二、材料343
三、操作方法344
四、注意事項345
五、應用345
參考文獻346

第十五章 PCR在癌癥診斷中的應用347
第一節 甲基化特異PCR347
一、引言347
二、基本原理347
三、材料347
四、方法348
五、注意事項349
六、應用350
七、小結351
參考文獻351
第二節 差異顯示PCR352
一、引言352
二、原理352
三、方法353
四、應用356
五、小結358
參考文獻358
第三節 PCR單鏈構象多態性359
一、原理359
二、材料360
三、方法360
四、注意事項362
五、應用363
參考文獻363
第四節 單細胞PCR364
一、引言364
二、基本原理364
三、材料和方法364
四、注意事項367
五、應用368
六、小結368
參考文獻369

第十六章 PCR在動物學中的應用370
第一節 微衛星PCR在動物分類和進化中的應用370
一、引言370
二、基本原理370
三、材料371
四、方法371
五、注意事項371
六、應用372
七、小結372
參考文獻372
第二節 巢式PCR在動物疾病診斷中的應用373
一、引言373
二、基本原理373
三、材料373
四、方法373
五、注意事項374
六、應用374
七、小結375
參考文獻375
第三節 T接頭介導PCR在轉基因動物外源基因定位中的應用375
一、引言375
二、原理376
三、材料376
四、方法376
五、注意事項377
六、應用378
七、小結378
參考文獻378
第四節 等溫擴增技術在動物學中的應用378
一、引言378
二、基本原理378
三、材料379
四、方法379
五、注意事項381
六、應用382
七、小結383
參考文獻383
索引384