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基因操作技術(簡體書)
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基因操作技術(簡體書)

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商品簡介
目次

商品簡介

《高職高專“十二五”規劃教材:基因操作技術》為項目化教學改革配套教材,具體以大腸桿菌絲氨酸羥甲基轉移酶基因(glyA)的克隆和表達為任務目標,按照基因工程的操作流程將相關知識和技能分解為前後連貫的9個項目、31項任務,涉及的主要內容包括核酸的分離純化技術、PCR技術、DNA體外重組技術、瓊脂糖凝膠和聚丙烯醯胺凝膠電泳技術、分子雜交技術、基因操作安全及防護技術,以及基因操作常用溶液及試劑配製方法等。全書突出技術原理和操作技能的有機融合,深入淺出,圖文並茂,便於學生“做中學”和“學中做”,適合項目載體、任務驅動的行動導向教學。
《高職高專“十二五”規劃教材:基因操作技術》可作為高職高專生物技術及應用、生物製藥技術、食品生物技術及相關專業師生的教材,也可供製藥、食品企業相關技術人員參考。

目次

項目一 基因操作安全及防護
【學習目標】1項目說明
必備知識
一、基因操作概述
二、基因操作安全及生物安全操作規範6項目實施
任務1.1 基因操作常用有毒化學試劑的選擇及其防護
任務1.2 基因操作常見儀器設備的選擇與使用
任務1.3 基因操作生物危害廢品的處理
【知識要點】
【技能要點】20能力拓展
一、實訓室用電安全及觸電急救
二、實訓室火災預防及燒傷急救
三、實訓室標準操作規程的撰寫
【實踐練習】

項目二 基因操作常用溶液及培養基配製
【學習目標】26項目說明
必備知識
一、化學試劑的規格和生物試劑的分類
二、溶液濃度的表示、調整和互換
三、溶液的配製
四、生物實驗室玻璃器皿的洗滌34項目實施
任務2.1 常用溶液和抗生素的配製
任務2.2 細菌常用培養基及配製
【知識要點】
【技能要點】43能力拓展
一、試劑盒
二、基因操作過程中的微量操作
三、基因操作實訓報告的撰寫
【實踐練習】

項目三 細菌基因組DNA的製備
【學習目標】47項目說明
必備知識
一、核酸的理化性質
二、核酸的分離提取原理
三、基因的概念、結構與表達55項目實施
任務3.1 操作準備
任務3.2 SDS法製備細菌基因組DNA
任務3.3 CTAB法製備細菌基因組DNA
任務3.4 煮沸法製備細菌基因組DNA
【知識要點】
【技能要點】68能力拓展
一、動物基因組DNA的提取
二、血液基因組DNA的提取
三、植物基因組DNA的提取
四、酵母基因組DNA的提取
五、總RNA和mRNA的提取
六、核酸固相抽提方法
【實踐練習】

項目四 PCR擴增目的基因——大腸桿菌
絲氨酸羥甲基轉移酶基因(glyA)
【學習目標】76項目說明
必備知識
一、PCR擴增原理
二、Taq聚合酶
三、PCR引物設計原則
四、PCR反應體系的組成及條件優化
五、常用PCR技術
六、PCR技術應用81項目實施
任務4.1 操作準備
任務4.2 基於glyA基因的引物設計
任務4.3 PCR擴增glyA基因
【知識要點】
【技能要點】87能力拓展
一、常見生物信息數據庫(軟件)介紹及使用
二、構建基因文庫獲得目的基因
三、用反轉錄PCR擴增目的DNA
【實踐練習】

項目五 質粒pET30a的小量製備
【學習目標】95項目說明
必備知識
一、質粒的一般特性
二、質粒的分類和命名
三、理想質粒載體的必備條件
四、常用的質粒載體98項目實施
任務5.1 操作準備
任務5.2 用堿裂解法小量製備質粒pET30a
任務5.3 用紫外分光光度法測定pET30a的濃度和純度
任務5.4 質粒pET30a的純化
【知識要點】
【技能要點】109能力拓展
一、表達載體
二、閱讀質粒載體圖譜
【實踐練習】

項目六 瓊脂糖凝膠電泳檢測染色體DNA、
PCR產物及質粒pET30a
【學習目標】117項目說明
必備知識
一、瓊脂糖凝膠電泳的基本原理
二、影響瓊脂糖凝膠DNA遷移速率的因素118項目實施
任務6.1 操作準備
任務6.2 瓊脂糖凝膠電泳檢測染色體DNA、PCR產物及質粒pET30a
任務6.3 從低熔點瓊脂糖凝膠中回收質粒pET30a
【知識要點】
【技能要點】126能力拓展
一、瓊脂糖凝膠電泳帶譜的拍攝及處理技術
二、隨機擴增多態性DNA(RAPD)
【實踐練習】

項目七 重組質粒的製備將絲氨酸羥甲基轉
移酶基因(glyA)克隆至質粒pET30a
【學習目標】132項目說明
必備知識
一、限制性核酸內切酶
二、DNA連接酶
三、DNA甲基化酶
四、其他工具酶140項目實施
任務7.1 操作準備
任務7.2 用BamHⅠ和NdeⅠ酶切PCR產物(glyA)和質粒pET30a
任務7.3 用T4DNA連接酶將glyA和pET30a連接形成重組質粒
【知識要點】
【技能要點】146能力拓展
一、酵母表達系統
二、限制性片段長度多態性(RFLP)
【實踐練習】

項目八 將含glyA基因的重組質粒
轉化至大腸桿菌DH5α
【學習目標】151項目說明
必備知識
一、感受態
二、轉化
三、重組子的篩選154項目實施
任務8.1 操作準備
任務8.2 大腸桿菌DH5α感受態細胞的製備
任務8.3 用熱激法將含glyA的重組質粒轉化至大腸桿菌DH5α
任務8.4 用電擊法將含glyA的重組質粒轉化至大腸桿菌DH5α
【知識要點】
【技能要點】163能力拓展
一、基因打靶技術
二、轉基因技術
三、農桿菌介導轉化技術
【實踐練習】

項目九 重組子的鑒定及基因表達產物分析
【學習目標】168項目說明
必備知識
一、聚丙烯醯胺凝膠電泳
二、SDS.聚丙烯醯胺凝膠電泳
三、核酸分子雜交171項目實施
任務9.1 操作準備
任務9.2 重組質粒的酶切鑒定
任務9.3 重組質粒的Southern印跡雜交鑒定
任務9.4 目的基因(glyA)的誘導表達
任務9.5 表達產物的SDS.PAGE分析
【知識要點】
【技能要點】190能力拓展
一、等電聚焦電泳
二、DNA芯片技術
【實踐練習】
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