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生物技術、生物工程綜合實驗指南（簡體書）
- 系列名：普通高等教育“十二五”規劃教材
- ISBN13：9787122182708
- 出版社：化學工業出版社
- 作者：邱業先
- 裝訂／頁數：平裝／187頁
- 規格：26cm*18.5cm*0.7cm (高/寬/厚)
- 版次：一版
- 出版日：2023/01/01
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商品簡介
作者簡介
名人/編輯推薦
序
目次
書摘/試閱
商品簡介
《生物技術、生物工程綜合實驗指南》是生物技術、生物工程專業在四年級上學期開設的一門的專業必修綜合性實驗課程。
《生物技術、生物工程綜合實驗指南》由16章內容組成，主要包括細胞工程（植物細胞和動物細胞工程技術）、微生物實驗技術、發酵工程、酶工程、基因工程、生物分離工程、食品生物技術、分子生物學技術、蛋白質組學技術、生物芯片技術和生物信息學基礎等內容。實驗內容基本覆蓋了生物技術的上中下游的全過程，各個實驗（模塊）既是獨立的，內容上又是聯系的。
《生物技術、生物工程綜合實驗指南》由16章內容組成，主要包括細胞工程（植物細胞和動物細胞工程技術）、微生物實驗技術、發酵工程、酶工程、基因工程、生物分離工程、食品生物技術、分子生物學技術、蛋白質組學技術、生物芯片技術和生物信息學基礎等內容。實驗內容基本覆蓋了生物技術的上中下游的全過程，各個實驗（模塊）既是獨立的，內容上又是聯系的。
作者簡介
邱業先，蘇州科技學院化學與生物工程學院，院長 教授，(包括教學、科研、設計、生產、經營、管理等方面，重點說明相關教學經歷及取得的成績。)
主要從事酶學及生物技術、生物工程等方面的教學研究工作。主講過本科和研究生的生物化學、分子生物學等課程，先后主持三項國家自然科學基金項目和省部級項目十余項。曾獲省科技進步2等獎一項，3等獎一項。先后在有關刊物發表學術論文90余篇。編寫全國統編本科教材5本。曾任江西省跨世紀學科帶頭人，江西省生化學會副理事長，江西省政府學位委員會委員。1996年獲國務院特殊津貼，2001年獲江西省優秀教師。先后招收碩士研究生25名（16名已畢業），博士研究生4名（1名已畢業）。
主要從事酶學及生物技術、生物工程等方面的教學研究工作。主講過本科和研究生的生物化學、分子生物學等課程，先后主持三項國家自然科學基金項目和省部級項目十余項。曾獲省科技進步2等獎一項，3等獎一項。先后在有關刊物發表學術論文90余篇。編寫全國統編本科教材5本。曾任江西省跨世紀學科帶頭人，江西省生化學會副理事長，江西省政府學位委員會委員。1996年獲國務院特殊津貼，2001年獲江西省優秀教師。先后招收碩士研究生25名（16名已畢業），博士研究生4名（1名已畢業）。
名人/編輯推薦
《普通高等教育"十二五"規劃教材·生物科學生物技術系列:生物技術生物工程綜合實驗指南》是生物技術、生物工程專業在四年級上學期開設的一門的專業必修綜合性實驗課程。
序
自大學擴招以來，全國有幾百所大學增設了生物技術和生物工程專業,而且很多大學都兼具這兩個專業。由于這兩個專業的實踐性較強，在培養模式上各院校往往都以加強動手能力的培養作為一個目標。開展生物技術大實驗或生物工程大實驗無疑是很多學校提高培養質量的重要內容。因此，急需一本既適合生物技術專業又適合生物工程專業選用的綜合實驗教材,據此,我們組織相關教師編寫了本教材。
本書的編寫遵循如下幾個原則來進行，一是力求做到實用；二是兼顧生物技術和生物工程專業的選用；三是兼顧了基礎性和先進性。
本書共分十三章，每章呈現一類生物技術，由若干個實驗組成，構成一個由淺入深的體系。書中選擇的實驗大多以學校目前開設的生物技術綜合大實驗為基礎,因此，本教材多數實驗已經過幾年教學實踐，具有可操作性強的特色。采用本書的院校可根據本校的實驗設備條件選擇若干章實驗，組合成一門綜合大實驗課程。
本書各章節編寫人員分工如下：第1章 金琎、王金虎，第2章 葉亞新、袁紅霞，第3章 汪金蓮、金萍，第4章 陳宏偉、邵愛華，第5章 劉悅萍、葛秀秀、陳宏偉，第6章 劉悅萍、張國慶，第7章 郭偉強、劉恒蔚，第8章 扶教龍、李良智，第9章 劉佳、胡翠英，第10章 邱業先、胡翠英，第11章 秦粉菊、姚雪梅，第12章 王桃云、錢瑋，第13章 陳佳佳，附錄 顧華杰。本書作者除劉悅萍、葛秀秀、張國慶為北京農學院的外，其余的均為蘇州科技學院的。其中,胡翠英、劉佳、錢瑋、郭偉強、顧華杰協助審稿。
這里要特別感謝化學工業出版社的編輯同志在審稿方面付出的大量心血。本書在編寫過程中還參考了國內外同行的著作，在此一并表示感謝。
希望本教材能對我國生物技術和生物工程人才培養起到積極作用。書中不妥之處敬請各位同仁指正。
邱業先2013年夏于蘇州
本書的編寫遵循如下幾個原則來進行，一是力求做到實用；二是兼顧生物技術和生物工程專業的選用；三是兼顧了基礎性和先進性。
本書共分十三章，每章呈現一類生物技術，由若干個實驗組成，構成一個由淺入深的體系。書中選擇的實驗大多以學校目前開設的生物技術綜合大實驗為基礎,因此，本教材多數實驗已經過幾年教學實踐，具有可操作性強的特色。采用本書的院校可根據本校的實驗設備條件選擇若干章實驗，組合成一門綜合大實驗課程。
本書各章節編寫人員分工如下：第1章 金琎、王金虎，第2章 葉亞新、袁紅霞，第3章 汪金蓮、金萍，第4章 陳宏偉、邵愛華，第5章 劉悅萍、葛秀秀、陳宏偉，第6章 劉悅萍、張國慶，第7章 郭偉強、劉恒蔚，第8章 扶教龍、李良智，第9章 劉佳、胡翠英，第10章 邱業先、胡翠英，第11章 秦粉菊、姚雪梅，第12章 王桃云、錢瑋，第13章 陳佳佳，附錄 顧華杰。本書作者除劉悅萍、葛秀秀、張國慶為北京農學院的外，其余的均為蘇州科技學院的。其中,胡翠英、劉佳、錢瑋、郭偉強、顧華杰協助審稿。
這里要特別感謝化學工業出版社的編輯同志在審稿方面付出的大量心血。本書在編寫過程中還參考了國內外同行的著作，在此一并表示感謝。
希望本教材能對我國生物技術和生物工程人才培養起到積極作用。書中不妥之處敬請各位同仁指正。
邱業先2013年夏于蘇州
目次
第一章植物細胞工程技術1
實驗一植物組織培養常用培養基的配制及滅菌1
實驗二植物組織快速繁殖技術——以脫毒快繁為例2
實驗三植物細胞懸浮培養技術3
實驗四聚乙二醇誘導植物原生質體融合5
實驗五農桿菌介導的遺傳轉化8
第二章動物細胞工程技術11
實驗一動物細胞培養基的配制與細胞計數11
實驗二動物細胞原代培養——鼠成纖維細胞的分離與永生化13
實驗三動物細胞繼代培養、凍存和復蘇15
實驗四細胞系培養18
實驗五外源基因在哺乳動物細胞系中的表達20
第三章微生物技術23
實驗一水中細菌總數的測定23
實驗二多管發酵法測定水中大腸菌群25
實驗三廢水硝化反硝化生物脫氮31
實驗四微生物吸附法去除重金屬34
實驗五有機污染物的微生物降解35
第四章基因工程技術39
實驗一菌液培養和質粒提取39
實驗二瓊脂糖凝膠電泳42
實驗三PCR擴增目的基因43
實驗四從PCR產物中回收目的DNA片段45
實驗五目的基因片段與載體連接（TA克隆）46
實驗六感受態菌的制備47
實驗七細菌轉化49
實驗八重組子的篩選與酶切鑒定50
第五章分子生物學應用技術54
實驗一Southern雜交54
實驗二Northern雜交56
實驗三Western印跡59
實驗四PCR引物設計63
實驗五隨機擴增多態性技術（RAPD）64
實驗六限制性片段長度多態性技術（RFLP）65
實驗七擴增片段長度多態性技術（AFLP）67
實驗八簡單序列重復技術（SSR）70
第六章蛋白質組學技術74
實驗一等電聚焦電泳74
實驗二SDS聚丙烯酰胺凝膠電泳78
實驗三磷酸化蛋白質組學——32P放射性標記檢測80
實驗四磷酸化蛋白質組學——PROQDiamond染色法82
實驗五定量蛋白質組學——蛋白質同位素標記83
實驗六定量蛋白質組學——熒光標記86
第七章生物芯片技術89
實驗一基因表達譜芯片檢測肺癌A549細胞89
實驗二蛋白質芯片檢測人肺癌A549細胞中細胞因子表達92
實驗三組織芯片技術94
第八章發酵工程技術96
實驗一發酵過程中微生物的菌體量與菌體密度及發酵液黏度測定96
實驗二發酵過程中溶解氧的控制與測定99
實驗三林可霉素發酵過程工藝控制103
實驗四L谷氨酸的發酵與提取108
實驗五生物油脂發酵過程工藝控制111
第九章食品生物技術116
實驗一葡萄酒釀造116
實驗二酸奶釀造及乳酸快速測定117
實驗三平菇生產技術119
第十章酶的分離提取與純化技術121
實驗一槭樹葉蛋白酶活力測定121
實驗二槭樹葉蛋白酶分離純化123
實驗三槭樹葉蛋白酶的氨基酸組成124
實驗四槭樹葉蛋白酶動力學126
實驗五槭樹葉蛋白酶抑制作用動力學127
第十一章酶固定化技術131
實驗一固定化酵母乙醇發酵131
實驗二固定化葡萄糖異構酶生產果葡糖漿134
實驗三β半乳糖苷酶的固定化及應用136
第十二章生物分離技術140
實驗一銀杏葉總黃酮提取、分離與初步鑒定140
實驗二溶菌酶的提取、分離純化及其活性測定145
實驗三超臨界萃取薄荷揮發油151
實驗四荷葉生物堿提取與分離純化153
實驗五平菇多糖提取與分離純化156
第十三章生物信息學基礎159
實驗一基因和基因組數據庫159
實驗二蛋白質數據庫160
實驗三同源性搜索163
實驗四分子系統發生分析164
附錄167
附錄一法定計量單位和單位換算167
附錄二常見緩沖液配制168
附錄三離心機轉速與相對離心力換算170
附錄四色譜法常用數據173
附錄五常用電泳緩沖液及凝膠加樣緩沖液176
附錄六植物組織培養常用培養基配方177
附錄七常見市售酸堿濃度178
附錄八主要的限制性核酸內切酶作用位點及切割形成DNA片段的平均大小179
附錄九幾種主要的質粒載體酶切位點及選擇標記180
附錄十常見元素的相對原子質量表185
附錄十一化學試劑規格186
實驗一植物組織培養常用培養基的配制及滅菌1
實驗二植物組織快速繁殖技術——以脫毒快繁為例2
實驗三植物細胞懸浮培養技術3
實驗四聚乙二醇誘導植物原生質體融合5
實驗五農桿菌介導的遺傳轉化8
第二章動物細胞工程技術11
實驗一動物細胞培養基的配制與細胞計數11
實驗二動物細胞原代培養——鼠成纖維細胞的分離與永生化13
實驗三動物細胞繼代培養、凍存和復蘇15
實驗四細胞系培養18
實驗五外源基因在哺乳動物細胞系中的表達20
第三章微生物技術23
實驗一水中細菌總數的測定23
實驗二多管發酵法測定水中大腸菌群25
實驗三廢水硝化反硝化生物脫氮31
實驗四微生物吸附法去除重金屬34
實驗五有機污染物的微生物降解35
第四章基因工程技術39
實驗一菌液培養和質粒提取39
實驗二瓊脂糖凝膠電泳42
實驗三PCR擴增目的基因43
實驗四從PCR產物中回收目的DNA片段45
實驗五目的基因片段與載體連接（TA克隆）46
實驗六感受態菌的制備47
實驗七細菌轉化49
實驗八重組子的篩選與酶切鑒定50
第五章分子生物學應用技術54
實驗一Southern雜交54
實驗二Northern雜交56
實驗三Western印跡59
實驗四PCR引物設計63
實驗五隨機擴增多態性技術（RAPD）64
實驗六限制性片段長度多態性技術（RFLP）65
實驗七擴增片段長度多態性技術（AFLP）67
實驗八簡單序列重復技術（SSR）70
第六章蛋白質組學技術74
實驗一等電聚焦電泳74
實驗二SDS聚丙烯酰胺凝膠電泳78
實驗三磷酸化蛋白質組學——32P放射性標記檢測80
實驗四磷酸化蛋白質組學——PROQDiamond染色法82
實驗五定量蛋白質組學——蛋白質同位素標記83
實驗六定量蛋白質組學——熒光標記86
第七章生物芯片技術89
實驗一基因表達譜芯片檢測肺癌A549細胞89
實驗二蛋白質芯片檢測人肺癌A549細胞中細胞因子表達92
實驗三組織芯片技術94
第八章發酵工程技術96
實驗一發酵過程中微生物的菌體量與菌體密度及發酵液黏度測定96
實驗二發酵過程中溶解氧的控制與測定99
實驗三林可霉素發酵過程工藝控制103
實驗四L谷氨酸的發酵與提取108
實驗五生物油脂發酵過程工藝控制111
第九章食品生物技術116
實驗一葡萄酒釀造116
實驗二酸奶釀造及乳酸快速測定117
實驗三平菇生產技術119
第十章酶的分離提取與純化技術121
實驗一槭樹葉蛋白酶活力測定121
實驗二槭樹葉蛋白酶分離純化123
實驗三槭樹葉蛋白酶的氨基酸組成124
實驗四槭樹葉蛋白酶動力學126
實驗五槭樹葉蛋白酶抑制作用動力學127
第十一章酶固定化技術131
實驗一固定化酵母乙醇發酵131
實驗二固定化葡萄糖異構酶生產果葡糖漿134
實驗三β半乳糖苷酶的固定化及應用136
第十二章生物分離技術140
實驗一銀杏葉總黃酮提取、分離與初步鑒定140
實驗二溶菌酶的提取、分離純化及其活性測定145
實驗三超臨界萃取薄荷揮發油151
實驗四荷葉生物堿提取與分離純化153
實驗五平菇多糖提取與分離純化156
第十三章生物信息學基礎159
實驗一基因和基因組數據庫159
實驗二蛋白質數據庫160
實驗三同源性搜索163
實驗四分子系統發生分析164
附錄167
附錄一法定計量單位和單位換算167
附錄二常見緩沖液配制168
附錄三離心機轉速與相對離心力換算170
附錄四色譜法常用數據173
附錄五常用電泳緩沖液及凝膠加樣緩沖液176
附錄六植物組織培養常用培養基配方177
附錄七常見市售酸堿濃度178
附錄八主要的限制性核酸內切酶作用位點及切割形成DNA片段的平均大小179
附錄九幾種主要的質粒載體酶切位點及選擇標記180
附錄十常見元素的相對原子質量表185
附錄十一化學試劑規格186
書摘/試閱
二、實驗條件
（1）實驗材料清潔級雄性成年昆明小鼠。
（2）實驗儀器恒溫培養箱，超凈工作臺，恒溫水浴箱，離心機，倒置相差顯微鏡，真空泵，電熱高壓蒸汽滅菌鍋，解剖剪，眼科剪，解剖鑷，培養瓶（150ml或200m1），表面皿，培養皿，吸管，玻璃除菌濾器，小燒杯，青霉素小瓶，血球計數板，吸管橡皮頭，橡皮瓶塞，200目尼龍濾網，50ml、15ml離心管和手術刀片。
（3）實驗試劑磷酸鹽緩沖液（PBS）（不含鈣鎂，pH 7.2），0.25％胰蛋白酶液（pH7.2～7.4），0.53mmol／L EDTA溶液，小鼠成纖維細胞（MEF）生長培養基，高糖DMEM加10％FCSl640培養液（含20％小牛血清），D—Hanks液，小牛血清，青霉素，75％酒精，5％NaHC03液，0.85％NaCl液，三蒸水或雙蒸水，二甲基亞砜（DMSO），丙三醇（甘油）。
三、實驗步驟
1.處死
取昆明小鼠一只，用頸椎脫臼法處死后立即浸入盛有75％酒精的燒杯中消毒處理2～3s，取出后立即放人超凈工作臺中的無菌培養皿中。
2.取材
無菌條件下，左手用鑷子提起小鼠腹部皮膚，右手用解剖剪剪開腹腔和胸腔，可同時剪去部分胸壁以充分暴露胸腔。用另一鑷子輕輕夾起粉紅色的肺組織并將其剪下置于Hanks液中，剪去血管等組織，用手術刀片將其剪碎成1mm×1mm×1mm。再用PBS液或Hanks液漂洗，除凈血液。
3.消化
剪碎的肺組織用5～8倍量的0.25％胰蛋白酶消化40min，且每隔5min輕輕晃動，使之充分消化。胰蛋白酶的消化作用能除去組織中的細胞間質，使組織松散成單個細胞或較小的細胞團。
4.離心
將上層細胞懸液倒入一裝有MEF生長培養基的離心管中，用200目尼龍濾網過濾后，1500r／rain離心5rain收集細胞。沉淀用DMEM重懸，再經800r／min離心5min，上清液經1500r／min離心5min，沉淀為純化的肺成纖維細胞。
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