分子醫學實驗技術（簡體書）

第一篇 分子醫學實驗技術概論
第一章 分子醫學實驗基本要求
第一節 實驗室規章制度與操作規范
一、實驗室規章制度
二、實驗注意事項及應急處理
三、實驗室基本操作技能
第二節 實驗記錄、數據處理和實驗報告
一、實驗記錄
二、實驗數據的處理和實驗誤差
三、實驗報告
第二章 分子醫學實驗樣品制備的原則、策略和方法
第一節實驗樣品制備的基本原則和策略
一、實驗樣品制備的基本原則
二、實驗樣品制備的基本策略
第二節 常用實驗樣品的制備 第一篇 分子醫學實驗技術概論 第一章 分子醫學實驗基本要求 第一節 實驗室規章制度與操作規范 一、實驗室規章制度 二、實驗注意事項及應急處理 三、實驗室基本操作技能 第二節 實驗記錄、數據處理和實驗報告 一、實驗記錄 二、實驗數據的處理和實驗誤差 三、實驗報告 第二章 分子醫學實驗樣品制備的原則、策略和方法 第一節實驗樣品制備的基本原則和策略 一、實驗樣品制備的基本原則 二、實驗樣品制備的基本策略 第二節 常用實驗樣品的制備 一、血液樣品 二、組織樣品 三、微生物樣品 四、植物樣品 第三節 生物大分子的制備 一、生物材料的選擇與預處理 二、組織細胞的破碎 三、抽提 四、生物大分子的分離、純化 五、純度的分析鑒定 六、產物的濃縮、干燥 第二篇 分子醫學實驗常用的技術和方法 第三章 離心分離技術 第一節 離心的基本原理和基本概念 一、離心的基本原理 二、離心的基本概念 第二節離心機分類和離心方法 一、離心機分類 二、離心方法 第三節離心機的使用操作 第四章 電泳技術 第一節 基本原理 一、電泳的基本原理 二、影響帶電粒子在電場中泳動的因素 第二節 電泳技術的分類 第三節電 泳裝置 第四節 電泳結果的檢測、分析和回收 一、電泳示蹤劑 二、電泳染色劑 三、電泳結果的檢測及回收 第五節 幾種常用的電泳方法 一、聚丙烯酰胺凝膠電泳 二、SDS一聚丙烯酰胺凝膠電泳 三、等電聚焦電泳 四、聚丙烯酰胺凝膠雙向電泳 五、蛋白印跡 六、DNA印跡和RNA印跡 第五章 層析技術 第一節 基本原理和概念 一、層析的基本原理 二、層析技術的基本概念 第二節 層析技術的分類 一、層析的分類 二、層析洗脫與檢測方法 第三節 吸附層析 一、吸附層析的原理 二、吸附層析的分類 三、固定相和流動相的選擇 四、薄層層析的制板、點樣、展層和顯色 第四節 分配層析 一、分配層析的原理 二、紙層析 第五節 離子交換層析 一、離子交換層析的原理 二、離子交換劑的類型 三、離子交換劑的選擇與應用 四、離子交換劑的處理、再生和保存 五、離子交換層析的操作 第六節 凝膠層析 一、凝膠層析的基本原理 二、凝膠的種類和性質 三、柱層析凝膠的選擇 四、凝膠的處理、保存和凝膠層析的操作 第七節 親和層析 一、親和層析的基本原理 二、親和層析載體、配體的選擇和偶聯 三、親和層析的操作 第八節 高效液相層析 一、高效液相層析的原理 二、HPLC的操作及注意事項 第六章 分光光度技術 第一節分光光度技術原理 一、基本原理 二、Lambert-Beer定律 三、分光光度技術的定量方法 第二節分光光度計的基本結構及使用 一、分光光度計的基本結構 二、幾種常用分光光度計 第七章 PCR技術 第一節 PcR的原理及影響因素 一、PCR的原理 二、PCR的反應體系及主要影響因素 第二節PCR技術的應用 一、逆轉錄PCR 二、單鏈構象多態性PCR 三、限制性片段長度多態性PCR 四、等位基因特異擴增法 第三篇實驗項目 第八章 蛋白質與酶學實驗項目 第一節概述 一、蛋白質的分子組成、結構及理化性質 二、蛋白質的分離和純化 三、蛋白質的定量 四、蛋白質純度的鑒定 五、蛋白質生物活性的測定 第二節實驗項目 實驗一 生物樣本中蛋白質的提取 實驗1-1 組織細胞中蛋白質的提取 實驗1-2 細菌細胞中蛋白質的提取 實驗二 蛋白質含量的測定 實驗2-l Kjeldahl定氮法測定蛋白質的濃度 實驗2-2 Folin一酚試劑法(IOWry法)測定蛋白質的濃度 實驗2-3 考馬斯亮藍法測定蛋白質的濃度 實驗2-4 紫外吸收法測定蛋白質的濃度 實驗2-5 BCA法測定蛋白質的濃度 實驗三 蛋白質的電泳分離 實驗3-l 聚丙烯酰胺凝膠電泳分離蛋白質 實驗3-2 SDS—PAGE測定蛋白質相對分子質量 實驗四 蛋白質印跡技術 實驗五 等電聚焦電泳法測定蛋白質等電點 實驗六 層析技術(凝膠過濾、離子交換、親和層析、HPLC) 實驗6-1 凝膠層析法分離血紅蛋白和DNP一魚精蛋白 實驗6-2 分子篩層析測定蛋白質相對分子質量 實驗6-3 離子交換層析分離混合氨基酸 實驗6-4 薄層層析分離脂類 實驗6-5 紙層析法驗證轉氨基作用 實驗6-6 高效液相層析分離蛋白質 實驗6-7 親和層析純化植物凝集素及凝集素活性鑒定 實驗七 底物濃度對酶促反應速度的影響——酸性磷酸酶K及V值測定 第九章 流式細胞技術 第一節概述 一、流式細胞術的基本原理 二、流式細胞術的應用 三、流式細胞儀操作規程 第二節 實驗項目 實驗八 用質控血檢測T淋巴細胞亞群 實驗九 細胞凋亡的流式實驗測定 第十章 核酸和染色體實驗 第一節 概述 一、核酸的分子組成與結構 二、核酸的理化性質 三、核酸的制備和含量測定 第二節 實驗項目 實驗十 DNA的提取 實驗10-1 真核生物組織細胞基因組DNA的提取 實驗10-2 真核生物血液標本中DNA的提取 實驗10-3 質粒DNA的提取 實驗十一 DNA含量和純度的i貝0定 實驗11-1 二苯胺顯色法測定DNA含量 實驗11-2 紫外吸收法測定基因組DNA的含量及純度 實驗十二RNA的制備 實驗12-1 一步法提取RNA 實驗12-2 Trizol Reagent一步法提取RNA 實驗十三地衣酚法測定RNA含量 實驗十四 逆轉錄一聚合酶鏈反應(RT—PcR) 實驗14-1 一步法RT—PCR 實驗14-2 兩步法RT—PCR 實驗十五 電泳法分離RNA和DNA 實驗15-1 瓊脂糖凝膠電泳分離DNA 實驗15-2 聚丙烯酰胺凝膠電泳(PAGE)分離RNA 實驗十六 人類外周血染色體標本制備 實驗十七 人類染色體G帶標本制備及觀察 實驗十八 人類染色體核型分析 實驗十九 遺傳病基因突變檢測分析 實驗19-1 Duchenne型肌營養不良癥DMD基因檢測 實驗19-2 遺傳病基因突變分析 實驗二十 基因多態性的檢測 實驗20-1 PCR-RFLP法測定CYP2c19m1等位基因 實驗20-2 等位基因特異擴增法分析基因中單堿基突變 第十一章物質代謝與激素調節 第一節 概述 一、物質代謝的概念 二、物質代謝研究的材料與方法 第二節 實驗項目 實驗二十一 胰島素及腎上腺素對血糖濃度的影響 實驗二十二 Nelson—Somogyi法測定血糖濃度 實驗二十三 飽食、饑餓及激素對肝糖原含量的影響 實驗二十四 血清谷丙轉氨酶活性的測定(賴氏法) 第十二章 自主創新性實驗 第一節概述 一、自主創新性實驗的分類 二、自主創新性實驗項目設計需要考慮或注意的問題 第二節 自主創新性實驗設計 一、基本程序 二、實驗設計的基本思路 附錄 一、常用數據表 表1 調整硫酸銨溶液飽和度計算表(25℃) 表2 蛋白質等電點參考值 表3 常見蛋白質相對分子質量參考值 表4 核酸、蛋白質換算數據 表5 SDS-PAGE分離膠配方表 二、常用試劑的配制 三、緩沖溶液及配制 四、透析袋的處理與保存 參考文獻