醫學細胞生物學與遺傳學實驗教程（簡體書）

《醫學細胞生物學與遺傳學實驗教程》是醫學科學知識結構的重要組成部分。本教程涵蓋了這兩個學科常用實驗方法中與基礎和臨床醫學關系密切的內容。上篇對每個實驗的目的、基本原理、操作流程和實驗結果做了比較詳細的介紹，而下篇則根據兩個學科的進展和未來發展趨勢，結合自身的教學和科研體驗，分別歸納出兩套可操作性較強，能夠體現學科間交叉滲透特點的綜合性實驗。因此，本教程既可作為學生的教科書，也能成為他們日後的實驗手冊。

《醫學細胞生物學與遺傳學實驗教程》中國科學院教材建設專家委員會規劃教材?全國高等醫藥院校規劃教材之一。

第一部分 醫學細胞生物學
上篇 基本實驗
第一章 顯微鏡的構造和使用
實驗1-1 普通光學顯微鏡的構造和使用方法、細胞的基本形態結構的觀察
實驗1-2 倒置相差顯微鏡的構造與使用
實驗1-3 顯微鏡測微尺的使用

第二章 流式細胞儀技術與應用
實驗2-1 流式細胞儀結構原理及應用
實驗2-2 流式細胞儀檢測細胞周期
實驗2-3 流式細胞儀檢測細胞凋亡
實驗2-4 流式細胞儀檢測細胞中抗原

第三章 細胞器結構的觀察與分離
實驗3-1 細胞器的電鏡照片及結構描述
實驗3-2 細胞器分級分離

第四章 細胞化學方法和細胞化學成分顯示
實驗4-1 細胞化學基本理論
實驗4-2 細胞中骨架蛋白的顯示與細胞形態的觀察
實驗4-3 Feulgen法顯示脫氧核糖核酸
實驗4-4 甲基綠一?洛寧顯示核酸
實驗4-5 蘇木素一伊紅染色顯示細胞核和細胞質

第五章 ?細胞化學
實驗5-1 ?細胞化學的基本原理
實驗5-2 堿性磷酸?顯示及用途
實驗5-3 聯苯胺法顯示過氧化物?及直用
實驗5-4 詹納斯綠顯示活體細胞線粒體
實驗5-5 通過琥珀酸脫氫?活性進行MTT檢測細胞相對存活率

第六章 免疫化學技術
實驗6-1 免疫?細胞化學法檢測髓母細胞瘤細胞中P65蛋白的表達
實驗6-2 免疫熒光染色顯示髓母細胞瘤細胞中Hesl蛋白的分布
實驗6-3 免疫組織化學法檢測Hesl在胃癌組織中的表達與分布

第七章 細胞培養技術
實驗7-1 細胞培養的基本原理與技術
實驗7-2 細胞的原代培養
實驗7-3 傳代細胞培養
實驗7-4 培養細胞的形態觀察和計數
實驗7-5 細胞凍存、復蘇與運輸
實驗7-6 細胞克隆化培養

第八章 細胞行為學
實驗8-1 細胞吞噬實驗
實驗8-2 細胞融合實驗
實驗8-3 細胞周期
實驗8-4 小鼠減數分裂
實驗8-5 細胞周期特定時相細胞同步化方法
實驗8-6 細胞運動的觀察

第九章 細胞衰老和凋亡的檢測
實驗9-1 蘇木素-伊紅染色法顯示凋亡細包
實驗9-2 Giansa染色法顯示凋亡細胞
實驗9-3 凋亡細胞的原位末端轉移?標記法(TUNEL法)
實驗9-4 細胞凋亡的瓊脂糖凝膠電泳檢測
實驗9-5 細胞衰老的檢測

第十章 蛋白質的分離與測定
實驗10-1 真核細胞蛋白質提取
實驗10-2 雙縮?法測定蛋白質濃度
實驗10-3 福林一酚法測定蛋白質濃度
實驗10-4 考馬斯亮藍法測定蛋白質濃度
實驗10-5 蛋白質印跡免疫分析(Westernblotting)

下篇 綜合實驗
第十一章 小鼠胚胎干細胞培養
實驗11-1 小鼠胚胎成纖維細胞的培養
實驗11-2 飼養層細胞的制備
實驗11-3 小鼠胚胎干細胞的分離及培養

第十二章 IL-6剝奪誘導小鼠B細胞雜交瘸細胞株7ID1細胞凋亡、觀察及檢測
實驗12-1 小鼠B細胞雜交瘤細胞株7ID1細胞復蘇與傳代培養
實驗12-2 7ID1細胞的凋亡誘導（IL-6剝奪）及細胞收集
實驗12-3 IL-6剝奪誘導7TD1細胞凋亡的形態特征觀察
實驗12-4 IL-6剝奪誘導7TD1細胞凋亡的DNA提取及凋亡梯狀帶檢測

第十三章 白藜蘆醇誘導髓母細胞瘤細胞分化觀察及相關基因的檢測
實驗13-1 細胞的培養與傳代
實驗13-2 白藜蘆醇處理前後細胞數量及形態的觀察以及免疫細胞化學染色
實驗13-3 總RNA提取和分化相關基因突觸素(synaptophysin)的RT-PCR檢測

附錄
附錄一 試劑濃度的表示方法及其計算
附錄二 常用人工合成細胞培養基的種類、化學組成及適用細胞
附錄三 實驗室常用細胞系（株）
附錄四 離心機轉數與離心力的換算表醫學細胞生物學部分參考文獻

第二部分 醫學遺傳學
上篇 基本實驗
第一章 常見人類遺傳性狀的分析與遺傳咨詢
實驗1-1 人遺傳病的家系分析與討論
實驗1-2 Bayes法在遺傳咨詢中的具體應用
實驗1-3 遺傳度、雜合度、多態信息量和吻合度測驗
實驗1-4 遺傳性疾病遺傳方式的估計
實驗1-5 多基因遺傳的人類皮膚紋理分析
實驗1-6 人類ABO血型的檢測和遺傳分析
實驗1-7 人類苯硫?(PTC)嘗味能力的遺傳分析
實驗1-8 人類常見單基因性狀的鑒定與群體遺傳學分析

第二章 細胞遺傳學相關的實驗
實驗2-1 人類性染色質標本的制備與觀察
實驗2-2 外周血淋巴細胞培養與染色體制備
實驗2-3 小鼠骨髓細胞染色體標本的制備與觀察
實驗2-4 染色體G顯帶技術
實驗2-5 核型分析
實驗2-6 小鼠骨髓嗜多染紅細胞微核測定
實驗2-7 人類姐妹染色單體交換(SCE)標本的制備與觀察（姐妹染色單體技術）
實驗2-8 熒光原位雜交

第三章 分子遺傳學相關的實驗
實驗3-1 真核生物組織及細胞基因組DNA提取
實驗3-2 組織及細胞中RNA的提取
實驗3-3 DNA與RNA含量測定
實驗3-4 聚合?鏈反應技術(PCR)體外擴增DNA片段
實驗3-5 逆轉錄聚合?鏈反應(Rr-PCR)
實驗3-6 實時定量PCR(real-time-PCR)
實驗3-7 DNA序列測定
實驗3-8 質粒DNA提取
實驗3-9 限制性核酸內切?對DNA進行?切
實驗3-10 電泳分離?切DNA片段
實驗3-11 DNA片段的回收與純化
實驗3-12 目的基因與載體片段的連接
實驗3-13 感受態細胞的制備
實驗3-14 重組DNA的轉化
實驗3-15 重組質粒的篩選
實驗3-16 核酸分子雜交技術

下篇 綜合實驗
第四章 基因多態性分析
第一節 概述
第二節 CYPIA1基因多態性與胃癌易感性的相關性研究

第五章 PCR-SSCP與基因點突變檢測
第一節 概述
第二節 PCR-SSCP方法檢測腫瘤細胞p53基因點突變

第六章 腫瘤細胞中基因印記狀態的檢測方法
第一節 概述
第二節 胃癌組織中胰島素樣生長因子-2基因印記缺失的檢測

第七章 腫瘤組織中p16抑癌基因表達檢測
第一節 概述
第二節 RT-PCR方法檢測胃癌組織中p16抑癌基因表達情況

第八章 腫瘤細胞中抑癌基因異常高甲基化檢測與分析
第一節 概述
第二節 胃癌細胞中抑癌基因p16啟動子區異常甲基化檢測

附錄
附錄一 SAGE技術
附錄二 基因芯片技術
附錄三 RNAi技術
附錄四 MicroRNA技術
附錄五 DNA甲基化檢測技術
附錄六 生物信息學研究方法醫學遺傳學部分參考文獻

（4）油浸鏡：鏡筒最長，鏡面直徑最小。筒上刻有100或100×字樣，即放大100倍。尚刻有HL表示油浸鏡；1.30為N.A值。
（5）目鏡：是僅次于物鏡的光學部件，它將物鏡放大形成的中間像進一步放大，便于觀察，但它并不能提高顯微鏡的分辨力。目鏡位于鏡筒上端，可裝有一個目鏡（單目鏡筒）或兩個目鏡（雙目鏡筒），其上刻有10×或15×等字樣，表示其放大倍數。目鏡通常由兩個透鏡組成，上面與眼接觸的為接目透鏡；下面的叫視野透鏡（在鏡筒內，可不觀察）。
顯微鏡的總放大倍數的計算是目鏡放大倍數與物鏡放大倍數之積。如目鏡為10×，物鏡為40，則物體放大倍數為400倍。
顯微鏡的使用方法
1.低倍鏡的使用
（1）顯微鏡的拿取與安放：使用時，打開鏡箱，右手握住鏡臂，左手托住鏡座，保持平穩狀態輕輕放在實驗臺上。如使用的為雙目鏡鏡筒的顯微鏡應放在觀察者的正前方；如使用的為單目鏡鏡筒的顯微鏡時，應放在觀察者的左前方。顯微鏡距桌緣約3～6cm。調節凳子的高度，使眼與目鏡接近，以便觀察并保持姿勢端正。
（2）對光：轉動旋轉盤，使低倍鏡對準鏡臺上的通光孔，當聽到“?”的輕微碰擊聲時，說明目鏡與物鏡的光軸一致。打開光闌，上升聚光器，兩眼睜開，經目鏡觀察，轉動反光鏡，使它朝向光源，直至目鏡中所見視野范圍內的光線均勻，亮度適宜為止。
（3）置片：取頭發或字母制片，使有蓋片的一面朝上，放在鏡臺上，用彈簧夾夾住（無蓋片的標本應使有材料的一面朝上）。然後用左手轉動推動器螺旋，將標本移至通光孔中央。
（4）調焦：俯首側視低倍鏡，轉動粗調節器使鏡臺上升至距標本0.5cm處，根據顯微鏡類型各取下述方法繼續操作：
1）使用單目鏡筒：用左眼從目鏡中觀察視野，同時右眼要張開。再慢慢轉動粗調節器，使鏡臺慢慢下降，直到視野中觀察物像清晰為止。
2）使用雙目鏡筒：首先調節雙目鏡間的距離，使之與觀察者的瞳間距一致。調節時分別用雙手的拇、食指把住目鏡下黑色橫板（雙目鏡筒間調節座）的邊緣，向外拉或向內推，此時雙眼在兩目鏡上觀察，直至看到一個大而明亮的視野為止，讀出目鏡筒間距數值。然後，旋轉右鏡筒長度補償環的刻度值，使與雙目鏡筒間距數值一致并對準環下外側的白色刻度線。再轉動粗調節器，使鏡臺慢慢下降，直到右眼所觀察的物像清晰。隨後再旋轉左鏡筒長度補償環，至物像清晰為止。通過以上操作，左右目鏡的焦點已對好，此鏡筒長就能保持物鏡的放大倍數和同等焦距正確，并調節雙目鏡筒的距離和補償觀察者兩眼的視度差。在操作時必須養成兩眼張開，兩手并用（右手操作調節器，左手操縱推進器）的習慣。
2.高倍鏡的使用先從低倍鏡下看清物像（如字母或頭發的交叉點）并移到視野中央，然後可直接換用高倍鏡觀察。轉換高倍鏡時速度要慢，并從側面觀察，防止高倍鏡碰撞玻片！轉換好高倍鏡後，從目鏡觀察，慢慢轉動細調節器（切勿用粗調節器，以防壓碎玻片、損壞鏡頭），直至物像清晰為止。觀察時如光線較弱，可調節聚光器等，使光線適宜。如在視野內找不到物像，說明觀察的目的物不在視野中央，或焦距不對，必須從低倍鏡開始按上述過程重新操作。