臨床分子生物學檢驗實驗指導(第三版)（簡體書）

《臨床分子生物學檢驗實驗指導(第3版)》內容簡介：近年來，分子生物學發展迅速，在醫學檢驗中的應用也越來越廣泛，已成為醫學檢驗的一個重要分支，在遺傳病、腫瘤、感染性疾病、心血管疾病等的診斷和治療中作用越來越重要。為了適應醫學檢驗教育發展的需要，人民衛生出版社于2003年組織編寫了第1版《分子生物學檢驗技術實驗指導》教材，2008年編寫了第2版，此教材自出版以來得到了各高校醫學檢驗專業師生的肯定和認可。為了讓教材更好的接近臨床，緊密結合臨床，經衛生部醫學檢驗專業教材評審委員會研究決定，將第3版實驗教材更名為《臨床分子生物學檢驗實驗指導》，此教材在前兩版的基礎上進行了較大修改和更新，新增加了自主設計性實驗，使之更新穎、更規范、更實用及更貼近臨床。《臨床分子生物學檢驗實驗指導》是作為呂建新教授、樊綺詩教授主編的《臨床分子生物學檢驗》的配套實驗教材，由人民衛生出版社組織編寫并出版。

《臨床分子生物學檢驗實驗指導(第3版)》供醫學檢驗專業用。

第一部分 分子生物學檢驗技術實驗室
一、分子生物學檢驗技術實驗須知
二、分子生物學檢驗技術實驗室介紹
三、分子生物學檢驗技術常用儀器
四、分子生物學實驗室生物安全

第二部分 核酸的分離與純化
實驗一 真核基因組DNA的分離與純化
實驗二 真核細胞mRNA的分離與純化
實驗三 質粒DNA的提取
實驗四 核酸的鑒定

第三部分 核酸擴增技術
實驗五 聚合?鏈反應
實驗六 PCR-RFLP檢測N-ras癌基因突變
實驗七 等位基因特異性擴增法檢測結核分枝桿菌rpoB基因突變
實驗八 TRAP-銀染法檢測端粒?活性
實驗九 多重PCR檢測α地中海貧血基因缺失
實驗十 PCR-SSCP檢測凝血因子V基因突變
實驗十一 實時PCR檢測乙型肝炎病毒(HBV)核酸
實驗十二 反轉錄，聚合?鏈反應檢測β-actin mRNA

第四部分 核酸分子雜交技術
實驗十三 探針的制備
實驗十四 DNA分子雜交
實驗十五 RNA分子雜交
實驗十六 熒光原位雜交
實驗十七 用反向點雜法進行β-地中海貧血基因診斷

第五部分 分子克隆技術
實驗十八 質粒DNA的限制性內切??切
實驗十九 目的片段的連接
實驗二十 感受態細胞的制備及重組子轉化
實驗二十一 重組子的鑒定

第六部分 其他分子檢驗技術
實驗二十二 真核細胞基因轉染技術
實驗二十三 Western印跡
實驗二十四 雙向聚丙烯?胺凝膠電泳
實驗二十五 HLA基因分型
實驗二十六 乙型肝炎病毒基因分型（芯片法）

第七部分 自主設計性實驗
附錄 分子生物學檢驗技術實驗中常用試劑和緩沖液的配制

（2）每天實驗結束之後一定要滅菌實驗臺及安全操作裝置。如實驗中發生污染，需立即加以滅菌。
（3）與實驗有關之生物材料之廢棄物，在丟棄前需做滅菌處理。被污染的器具需先經高壓滅菌後，再清洗使用或丟棄。
（4）不得用口做吸量操作。
（5）實驗室內禁止飲食、吸煙及保存食物。
（6）操作重組體時需戴手套以防污染，操作完畢後及離開實驗室前需洗手。
（7）在所有的操作中，應盡量避免產生氣霧（例如，把燒熱的接種用白金環及接種針插入培養基時，若發生大量氣霧，就可能造成污染）。亦應避免將吸管或針筒內之液體用力射出。
（8）要從實驗室搬離被污染物品時，必須將其放入堅固且不外漏的容器，并在實驗室內密封之後，才可運出。
（9）防除實驗室的非實驗用生物，如昆蟲及鼠類等。
（10）若有其他方法可用，應避免使用針頭。
（11）實驗室內，要穿著實驗衣，離開前要脫掉。
（12）禁止對實驗性質不了解的人進入實驗室。
（13）實驗進行中，要在實驗室之入口，標示“P2級實驗室”，并掛上“P2級實驗進行中”的標示。而且保存重組體之冰箱及冷凍庫也要做同樣的標示。
（14）實驗室要經常清理，保持清潔，不得放置與實驗無關的物品。
（15）安全操作裝置內的HEPA過濾器，在更換前、定期檢查時及實驗內容變更時，需密封安全操作裝置。
（16）若在此級實驗室內同時進行P1級的實驗時，需明確劃分實驗區域，小心進行操作。
（二）基因擴增實驗室
基因擴增實驗室是以體外擴增檢測DNA或RNA為目的的實驗室。由于體外基因擴增的高靈敏度，因此對其實驗室有較嚴格的要求。
基因擴增實驗室應嚴格分區操作，各個區域需要有專用的儀器設備。一般要求基因擴增實驗在四個分隔開的工作區域內進行，即分成四個區：試劑貯存和準備區、樣本制備區、擴增反應混合物配制和擴增區、擴增產物分析區。試劑貯存和準備區主要進行貯存試劑的制備、試劑的分裝和主反應混合液的制備。此區域需配備的儀器設備有普通冰箱、混勻器、微量移液器及消耗品等。樣本制各區主要進行樣本的處理與保存、核酸（DNA、RNA）提取、貯存及加入到擴增反應管和測定mRNA時cDNA的合成等。需要配備的儀器設備包括普通冰箱、低溫冰箱、高速臺式離心機、混勻器、水浴箱、微量移液器、超凈工作臺等。擴增反應混合物配制和擴增區主要進行DNA或cDNA的擴增。由于擴增後的核酸量特別大，是最易導致污染（即所謂“產物污染”）的地方。配備的儀器設備包括核酸擴增儀，微量移液器等。最後一個區域是擴增產物分析區，主要進行擴增產物的分析、鑒定，如瓊脂糖凝膠電泳、聚丙烯?胺凝膠電泳、膜上或微孔板上探針雜交、印跡轉移、核酸測序等。
（三）細胞培養室細胞培養室是進行體外培養工作的實驗室，它有別于一般的實驗室。細胞培養室最好是按標準培養室的設計方案建立專用的實驗室，設計原則是防止微生物污染和有害物的影響，環境要求清潔、空氣清新、無塵和干燥。