醫學細胞生物學實驗與學習指導（簡體書）

第五部分 細胞培養實驗
實驗十三 胎鼠成纖維細胞的原代培養
一、實驗目的
（1）了解細胞原代培養的基本原理和方法；
（2）掌握哺乳動物細胞原代培養的取材、消化及無菌操作等基本實驗技術和操作流程；
（3）學習在倒置顯微鏡下觀察培養細胞形態和生長狀況的方法。
二、實驗原理
細胞培養已經成為生命科學和醫學研究最常用的基礎技術之一，它是將細胞從機體中取出，在模擬機體內生理條件下，使其生存、生長、繁殖和傳代的技術。通過細胞培養，可以對細胞生命過程、細胞癌變、細胞工程等問題進行研究。細胞培養的直接目的是維持或擴增細胞數量。依據取材的不同，細胞培養分為原代培養和傳代培養。
原代培養（Primary Culture）是從供體取得組織或細胞后在體外進行首次培養直至成功進行首次傳代之前的培養。由于細胞剛剛從活體組織分離出來，故更接近于生物體內的生活狀態。這一方法可為研究生物體內細胞的生長、代謝和繁殖提供有力的手段。利用此方法可直接服務于臨床實踐。例如，用從手術中切除的腫瘤細胞進行原代培養，然后利用該細胞進行抗癌藥物的篩選等。
小鼠胚胎成纖維細胞在基礎醫學和臨床醫學研究中得到較廣泛的應用，其分離培養技術已相對成熟，對其體外生長規律也有了較全面的認識。目前，主要用于飼養層細胞，應用于胚胎干細胞或克隆細胞的共培養，主要起到促進后者增殖并抑制其自主分化的功能。本實驗主要采用組織消化法分離并培養小鼠胚胎成纖維細胞。該方法主要是將較小體積的動物組織中妨礙細胞生長的間質加以分解、消化，使組織中結合緊密的細胞連接松散、相互分離，細胞失去與間質的連接，活細胞從組織中釋放出來形成含單細胞或細胞團的懸液，分散的細胞易與外界進行新陳代謝互動，在短時間內即可貼壁生長成片。
三、實驗用品
1.器材
倒置顯微鏡、超凈臺、CO2培養箱、尖頭鑷子、移液槍、眼科剪、最大轉速為5000r／min的離心機、酒精燈、96孔培養板、大中小培養皿、0.5mL離心管、1.5mL離心管、15mL離心管。
2.材料
小鼠或孕鼠。
3.試劑
10％FCS—DMEM培養基、0.25％胰酶、生理鹽水或PBS液。