基因工程實驗指導(第2版)（簡體書）

為了適應學科的發展與實際需要，本實驗教材在第1版的基礎上進行了修改和補充，擴展了部分實驗內容，增加了一些最新進展的實驗技術，由原來的35個實驗增加為49個實驗，使其在內容上更加豐富和完善。第2版的編寫除了繼續保持第1版的寫作特點和基本要求外，著重擴充了基因的克隆、鑑定方法以及蛋白質化學分析的一些新技術和新發展，此外還添加了部分真核生物酵母的實驗。書中選用了一批新的插圖、照片，以使教材內容形象、直觀，可讀性強。 本教材中所有實驗比較系統地介紹了與實驗內容相關的基本原理，強調指出了實驗中的注意事項，并對與實驗相關的內容進行評議，以利于讀者更好地理解實驗，起到實驗指南的作用。書末附錄部分還包含了試劑的配制等內容，方便讀者參考。本教材可作為本科生或者研究生的基因工程實驗教學的參考書。

實驗計劃表
導論
1 基因文庫的構建
1一l 染色體DNA的提取
1-2 總RNA和mRNA的提取
1-3 λ噬菌體DNA的提取
1-4 染色體DNA的部分消化
1-5 基因組文庫的構建
1-6 cDNA合成
1-7 cDNA文庫的構建
2 目的基因的獲得
2-1 PCR擴增
2-2 核酸電泳
2-3 目的基因片段的獲得
2-4 核酸探針的標記及檢測
2-5 核酸探針篩選基因文庫
2-6 反轉錄PCR
2-7 RACE PCR
2-8 反向PCR
2-9 Sitefinding-PCR
3 載體質粒的制備
3-1 質粒DNA的提取與純化
3-2 核酸純度、濃度與相對分子質量的測定
4 擴增質粒的構建
4-1 限制性內切酶的酶切反應
4-2 凝膠電泳法進行DNA的分離與純化
4-3 DNA片段的體外連接
4-4 T-A克隆
5 重組DNA導入宿主細胞
5-1 感受態細胞的制備
5-2 重組質粒的轉化
5-3 外源基因在畢赤酵母中的轉化與整合
6 重組子的篩選與鑑定
6-1 陽性克隆的篩選
6-2 DNA序列測定
6-3 序列同源性分析
6-4 DNA印跡
6-5 菌落原位雜交
6-6 熒光原位雜交
7 表達質粒的構建與誘導表達
7-1 表達質粒的構建與轉化
7-2 RNA印跡
7-3 外源基因的誘導表達
7-4 蛋白質濃度的測定
7-5 SDS-PAGE
7-6 蛋白質印跡
8 蛋白質樣品的分析
8-1 等電聚焦電泳
8-2 雙向電泳
8-3 非變性聚丙烯酰胺凝膠電泳
8-4 酶聯免疫吸附測定（ELISA）
8-5 蛋白質生物功能測定
8-6 酶活性的測定
9 工程菌的培養與目的產物分離
9-1 發酵條件的優化
9-2 包含體的復性
9-3 誘導表達蛋白質的分離沉淀
9-4 凝膠過濾層析
9-5 離子交換層析
9-6 親和層析
附錄1 簡寫
附錄2 實驗注意事項
附錄3 如何撰寫實驗報告
附錄4 常用堿基、氨基酸符號及緩沖液
附錄5 大腸桿菌基因型
附錄6 培養基與試劑的配制
附錄7 實驗儀器
參考文獻