原子力顯微鏡在大分子研究中的應用（簡體書）

實驗所用pBR322／Pst I DNA分子購買于華美生物科技公司（北京）。所用其他的化學試劑均為分析純，在使用前未經過進一步純化。當在GFPH。的單層膜上固定DNA分子時，取50L含有5n9／gL pBR322／Pst I DNA分子和5ramolNiClz的混合液滴加到已制備的覆蓋有水膜的GFPH6單層膜上。吸附30min后，云母表面用大量的純水洗滌，然后立刻滴加500L的純水到云母表面。將此云母片小心的裝入到原子力顯微鏡的液相成像池中（帶有“O”型圈），隨后進行原子力顯微鏡成像。
實驗中使用了MI公司（AZ，USA）的PicoPlus原子力顯微鏡系統用于本實驗的原子力顯微鏡成像。當在水中成像吸附在云母表面的GFPH6時，原子力顯微鏡使用敲擊模式。1009m長的窄臂氮化硅力常數為0.32N／m，探針曲率半徑為20nm。成像時探針的共振頻率為l20kHz，掃描速度為4～71am／s。本實驗在液相下所用驅動頻率（120kHz）高于一般報道的液相成像所用頻率（通常小于30kHz）。我們在以前的研究中也證實了在液相下較高的頻率（100kHz左右）能夠得到很好的成像。運用原子力顯微鏡在EGFPH6單層膜上進行機械刻蝕和成像使用同一探針。刻蝕的圖案用VBScript程序進行設計和編輯，在PicoScan 5.3.3程序中執行。GFPH4的高度、長度和寬度通過PicoScan 5.3.3手動測量。
氣相下用原子力顯微鏡成像GFPH6時，使用了MikroMasch NSCl5力常數為40N／m、曲率半徑<10nm的探針用于成像。氣相敲擊模式成像使用的共振頻率為325khz。>
Nikon公司的激光共聚焦熒光顯微鏡（1aser confocal fluorescence microscoDvC1）用于GFPH6的熒光成像。488nm的激光用于激發GFPH6，產生的綠光可被成像。原子力顯微鏡成像的樣品直接被用于了熒光成像。
2）結果和討論
1009L 7.5ng／L的GFPH6在云母表面吸附lmin后，在云母表面用原子力顯微鏡觀察到的GFPH6成像如圖4—4a所示。此時，大量的GFPH6被吸附到云母的表面，大多數的GFPH6為完全分散的單分子。在圖4—4a中左下角的插圖為GFPHs的高分辨原子力顯微鏡成像。用原子力顯微鏡觀察到的GFPH6呈長方體狀。觀察到的GFPH6的長度、寬度和高度用原子力顯微鏡進行了測量所得的結果在表4—1中給出。GFP的晶體結構已被進行詳細的解析（Ormo et al.，1996；Yang et al.，1996）。GFP被解析為由11個β—sheets組成的圓筒狀結構，其直徑約為2·4nm，高度約為4.2nm。