真菌生物學實驗教程（簡體書）

真菌是地球生物圈中僅次於動物和植物的第三大類真核生物。無論是在人類探索生命的奧秘中還是在解決人類可持續發展的重大問題中，真菌像動植物一樣是不可或缺的極為寶貴的自然資源。當今世界生物信息技術高速發展，學科之間的交叉已成為必然的發展趨勢，由此而產生的新技術的問世為生物學家揭示生命本質的研究提供了良好的機遇。1996年，在歐洲、美國、加拿大和日本共96個實驗室的633位科學家通力協作下，第一個真核生物釀酒酵母的基因組測序完成，由此開創了生物基因組學的新紀元，也為深入研究真菌的生物學特性及促進醫療衛生、工業、農業、環境保護及能源開發等多個領域的發展帶來了不竭動力。真菌作為真核生物的原始代表被推向生物技術的前沿，面對這種挑戰，我國的真菌學科需要追趕國際先進水平，培養高層次創造型人才和產生高水平科研成果是真菌學科發展的關鍵。
為改變當前各院校真菌實驗教學的鬆散狀況，中國農業大學與南開大學等5所高校教師合作，本著寬口徑、厚基礎、著力培養人才的創新意識，提高創新思維能力，共同編寫了《真菌生物學實驗教程》-書。為我國真菌學科的教學發展做出了應有的努力，為培養我國真菌學科的優秀人才打下了堅實的實驗技術基礎，為通往真菌的神秘世界架起一座橋樑是本書編寫者的共同心願。
本書採用現代真菌研究的技術原理和方法，以真菌的形態分類、生理代謝及遺傳變異的典型實驗作為選材的指導思想，既強調了不同研究方法的理論意義，又詳細描述了操作步驟，並對關鍵步驟做了重點提示，對主要設備原理及使用方法進行了簡要說明。每個實驗都提出問題供讀者思考和討論。本書還提供了目前公認並常用的真菌分類體系。中國高等真菌學科的開拓者和中國黏菌研究的奠基人、著名植物病理學家、教育家周宗璜教授生前無償贈予的黏菌子實體標本，我們已珍藏多年，藉這次編寫實驗教程的機會，將部分黏菌拍攝成圖片展現給讀者。
本書選圖有些由本課程教師和學生自行拍攝，除特殊說明外，還引用了《菌物學概論》（2002）、《半知菌圖譜》（1980）等書的圖例，已在書中說明。本教程實驗一～實驗六由李穎、田傑生編寫，實驗七由張國珍編寫，實驗八、實驗十二、實驗十五～實驗十七由李穎編寫，實驗九～實驗十一由李明春編寫，實驗十三、實驗十四由張金祥編寫，實驗十八由王瑜編寫，實驗十九由梁連銘編寫；實驗二十由胡啟文編寫；一些模式真菌切片圖和黏菌照片由田傑生和中國農業大學生物學院本科生李凝簫、孫嬡等拍攝，全書由李穎和李明春統籌整理，由邢來君教授主審。此外，本書配備的附加文件中還收集了本科生鄧斯文、吳家曦、李妍、劉建新、張倩和韓宇明等同學自行分離和鑑定所得到的菌株信息、圖片，有張一語同學自行培養及拍攝的水黴游動孢子錄像，有典型真菌學名發音帶讀錄音（見科學出版社教學服務網站）。
本書的撰寫得到了中國農業大學生物學院“教育部高等學校專業綜合改革試點”項目的資助；感謝現在法國工作的MorrisCindy博士、PhilippeNicot博士和中國農業大學生物學院微生物及免疫學系王賀祥教授以標準純正的英語和中文發音帶讀真菌學名；感謝中國農業大學電子顯微鏡室賈君鎮老師和光學顯微鏡室周海鷹老師、梁麗萍老師分別提供了掃描電鏡和冷凍切片樣品的製備方法及圖片；感謝科學出版社給予的全力支持與幫助。在此也向為本書編寫提供實驗材料和參加預試的中國農業大學生物學院博士研究生關菲菲、王貴利、黃金金、王旭及南開大學博士研究生喻其林和碩士研究生丁曉慧表示衷心感謝！
我們希望把教學中所用的資料信息提供給指導教師和學生，然而限於作者水平，仍然存在不足之處，望廣大讀者提出批評和建議，以便本書再版時做出修訂。

總序
前言
實驗一壺菌綱、卵菌綱代表菌形態特徵觀察1
一、實驗目的1
二、實驗原理1
三、實驗材料1
四、實驗內容及步驟2
五、實驗報告（作業） 11
六、思考題11
七、參考文獻11
附：半永久裝片的製作方法11
實驗二接合菌門真菌的鑑定12
一、實驗目的12
二、實驗原理12
三、實驗材料12
四、實驗內容及步驟12
五、實驗報告（作業） 17
六、思考題17
七、參考文獻18
附：培養水玉黴圖示18
實驗三子囊菌門代表菌形態特徵觀察19
一、實驗目的19
二、實驗原理19
三、實驗材料19
四、實驗內容及步驟20
五、實驗報告（作業） 28
六、思考題28
七、參考文獻28
附：真菌的石蠟製片技術流程29
實驗四擔子菌門代表菌的形態特徵觀察31
一、實驗目的31
二、實驗原理31
三、實驗材料31
四、實驗內容及步驟31
五、實驗報告（作業） 38
六、思考題38
七、參考文獻39
附：冷凍切片實驗流程及注意事項39
實驗五半知菌類代表菌形態特徵觀察42
一、實驗目的42
二、實驗原理42
三、實驗材料42
四、實驗內容及步驟43
五、實驗報告（作業） 48
六、思考題48
七、參考文獻49
附：掃描電子顯微鏡樣品製作及觀察絲狀真菌49
實驗六黏菌基本形態特徵的觀察51
一、實驗目的51
二、實驗原理51
三、實驗材料51
四、實驗步驟52
五、實驗報告（作業） 53
六、思考題54
七、參考文獻54
附：幾種黏菌屬種描述，請在體視顯微鏡下觀察所提供的標本54
黏菌子實體圖例55
實驗七絲狀真菌細胞核的DAPI染色及觀察57
一、實驗目的57
二、實驗原理57
三、實驗材料57
四、實驗步驟58
五、實驗報告（作業） 58
六、思考題59
七、參考文獻59
附：熒光顯微鏡簡介及使用步驟59
實驗八釀酒酵母原生質體製備與再生62
一、實驗目的62
二、實驗原理62
三、實驗材料62
四、實驗步驟63
五、實驗報告（作業） 64
六、思考題64
附：幾種細菌過濾器及其使用65
實驗九稻巨座殼菌自噬體的顯微觀察66
一、實驗目的66
二、實驗原理66
三、實驗材料68
四、實驗步驟70
五、實驗報告（作業） 71
六、思考題71
七、參考文獻71
實驗十氧化脅迫誘導白假絲酵母細胞凋亡的熒光檢測72
一、實驗目的72
二、實驗原理72
三、實驗材料74
四、實驗步驟75
五、實驗報告（作業） 76
六、思考題76
七、參考文獻76
實驗十一絲狀真菌疏水蛋白的分離提取和檢測77
一、實驗目的77
二、實驗原理77
三、實驗材料80
四、實驗步驟80
五、實驗報告（作業） 83
六、思考題83
七、參考文獻83
實驗十二絲狀真菌DNA快速提取及其18S rDNA序列測定84
一、實驗目的84
二、實驗原理84
三、實驗材料85
四、實驗步驟86
五、實驗報告（作業） 88
六、思考題88
七、參考文獻88
實驗十三絲狀真菌總RNA及mRNA的提取與檢測89
一、實驗目的89
二、實驗原理89
三、實驗材料92
四、實驗步驟94
五、實驗報告（作業） 96
六、思考題96
七、參考文獻96
實驗十四細菌源耐熱木聚醣酶基因在黑曲霉中的表達98
一、實驗目的98
二、實驗原理98
三、實驗材料101
四、實驗步驟105
五、實驗報告（作業） 107
六、思考題107
七、參考文獻107
實驗十五脂肪酶基因在畢赤酵母中的表達與目的蛋白檢測108
一、實驗目的108
二、實驗原理108
三、實驗材料110
四、實驗步驟110
五、實驗報告（作業） 113
六、思考題113
七、參考文獻113
實驗十六真核細胞表達異源蛋白的糖基化修飾及檢測114
一、實驗目的114
二、實驗原理114
三、實驗材料及試劑116
四、實驗步驟116
五、實驗報告（作業） 118
六、思考題118
七、參考文獻118
實驗十七多拷貝異源基因重組表達體系的構建及其qPCR檢測119
一、實驗目的119
二、實驗原理119
三、實驗材料120
四、實驗步驟121
五、實驗報告（作業） 125
六、思考題125
七、參考文獻126
附：實時熒光定量PCR儀圖示及其基本技術原理詳解126
實驗十八採用重疊PCR技術敲除粟酒裂殖酵母Clr4基因128
一、實驗目的128
二、實驗原理128
三、實驗材料130
四、實驗步驟132
五、實驗報告（作業） 135
六、思考題135
七、參考文獻135
實驗十九利用細菌CRISPR/Cas系統敲除釀酒酵母目的基因136
一、實驗目的136
二、實驗原理136
三、實驗材料138
四、實驗步驟139
五、實驗報告（作業） 140
六、思考題141
七、參考文獻141
實驗二十粗糙脈孢菌雙基因缺失突變體的構建及雙基因的遺傳互作分析142
一、實驗目的142
二、實驗原理142
三、實驗材料144
四、實驗步驟147
五、實驗報告（作業） 148
六、思考題149
七、參考文獻149
附錄1常用培養基配方及染色液150
附錄2安斯沃思（Ainsworth，1973）的分類系統159
附錄3真菌詞典第八版（1995年）的分類體系160
附錄4真菌詞典第九版（2001年）的分類體系161
附錄5真菌詞典第十版（2008年）的分類體系163
附錄6互動實驗室設備使用原則及方法（學生端的使用） 165
附錄7真菌常用網站167
附錄8常用真菌學名列表169
附錄9真菌圖例179
附錄10黏菌子實體圖例185
附錄11實驗七和實驗十彩圖186