食品工程實驗技術（簡體書）

如前所述，凝膠過濾層析時溶質的洗脫體積不僅與相對分子質量有關，還與分子形狀密切相關，具有相同相對分子質量的球狀分子和纖維狀分子在洗脫性質上差異很大。因此，在進行相對分子質量測定時，選用的相對分子質量標準應當與所測目標分子有相似的形狀。例如，測定多糖物質的相對分子質量時，應選用葡聚糖等鏈狀分子作為相對分子質量標準。
4）測定多聚物的相對分子質量分布
很多天然的或合成的多聚物并不是均一的分子，而是由不同數目的單體分子聚合而成，形成相對分子質量和聚合程度不同的混合物，這種現象稱為聚合物相對分子質量的不均一性或多分散性，而這些混合物相對分子質量分布是其重要的性質。相對分子質量分布是指混合樣品中各種相對分子質量組分在總量中所占的各自的分量，它可以用一條分布曲線或一個分布函數來表示。例如，用混合物中各組分在總質量中所占的質量分數對相對分子質量作圖，得到相對分子質量分布曲線。該曲線的寬度代表了多聚物的多分散程度，根據該曲線還能計算出多聚物的平均相對分子質量。目前，凝膠過濾法已用于測定淀粉、多肽、多糖等的相對分子質量分布，編者課題組前期也采用凝膠過濾色譜對酸法、堿法和酶法三種方法水解魚骨蛋白得到的蛋白肽的相對分子質量分布進行了研究。選用了Sephadex G一25層析柱分離，洗脫劑為0.90氯化鈉—0.020疊氮鈉溶液，采用分部收集器收集，流速為4.8mL／管，6管／h。將酸法、堿法、酶法水解液過凝膠色譜后收集到的洗脫液吸光值對洗脫體積作圖，結果如圖2—75所示。由圖2—75可以看出，三種方法的水解產物均是由2～4種組分組成的混合物。酸法水解最徹底，生成的小分子肽和氨基酸最多，低相對分子質量組分所占比例最大，其次是堿法；酶法水解由于酶對底物的專一性，水解位點有限，因此水解度低，小分子所占比例小，但酶法水解產物通常具有生物活性。
5）混合物的分級分離
凝膠過濾層析更多的是作為分離純化手段而被采用，這也是所用層析技術中唯一的按分子大小進行分離的技術，因此，將凝膠過濾與其他層析技術結合使用往往可以獲得較為理想的純化效果。由于凝膠過濾層析的加樣體積受到嚴格的限制，通常一次只能對較少的樣品進行分析，并且過多的雜質會對介質產生污染，因而此技術較多地在整個分離計劃的后期被采用。
（1）分離蛋白質和肽類。
在純化時理想情況是有一種凝膠能夠將目標分子排阻在外，而雜質分子進入凝膠內部，或者目標分子進人凝膠內部而雜質分子被排阻在外。但是這種情況很難出現，總是會有一些雜質分子由于相對分子質量與目標物質相近而同時進入凝膠或者同時被排阻。