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《生物化學與分子生物學實驗技術教程（第三版）》將生物化學實驗和分子生物學實驗融為一體，前5章按照實驗技術自身的體系，簡明通俗、圖文並茂地講述了生物化學與分子生物學實驗技術理論，既可由教師講授，也可由學生自學。同時將53個難度不等的基礎實驗按技術類別分列于5章中，可供不同條件的學校選做。第六章介紹了開設綜合性實驗和設計性實驗的目標和方法，編入3個難度適中的綜合性實驗。
名人/編輯推薦
楊建雄等編著的《生物化學與分子生物學實驗技術教程(第3版）》將生物化學實驗和分子生物學實驗融為一體，前5章按照實驗技術自身的體系，簡明通俗、圖文并茂地講述了生物化學與分子生物學實驗技術理論，既可由教師講授，也可由學生自學。同時將53個難度不等的基礎實驗按技術類別分列于5章中，可供不同條件的學校選做。第六章介紹了開設綜合性實驗和設計性實驗的目標和方法，編人3個難度適中的綜合性實驗。
本書適合于生物科學、生物技術、生物工程等專業和醫學院校、農林院校本科生的實驗課教學使用，通過講授和操作結合的模式進行實驗課教學。或由學生自學實驗技術理論部分，再由實驗課對學生進行系統的實驗技能培訓。本書還可供部分專業碩士研究生實驗技術課使用，及作為有關科技人員的參考用書。
本書適合于生物科學、生物技術、生物工程等專業和醫學院校、農林院校本科生的實驗課教學使用，通過講授和操作結合的模式進行實驗課教學。或由學生自學實驗技術理論部分，再由實驗課對學生進行系統的實驗技能培訓。本書還可供部分專業碩士研究生實驗技術課使用，及作為有關科技人員的參考用書。
目次
第三版前言
第二版前言
第一版前言
第一章 定量分析技術
第一節 滴定分析法
一、基本原理
二、標準溶液
三、滴定分析的計算
四、減小滴定誤差的方法
第二節 紫外可見分光光度法
一、基本原理
二、分光光度計的主要部件
三、分光光度法的定性和定量
四、減小測定誤差的方法
第三節 熒光分析法
一、基本原理
二、熒光儀的主要部件
三、熒光分析法的定性和定量
四、減小測量誤差的方法
第四節 酶活力及動力學數據的測定
一、酶活力的測定
二、Km和Vmax的測定
三、其他動力學數據的測定
實驗1―1 粗脂肪的提取和定量測定
實驗1―2 碘價的測定(Hanus法)
實驗1―3 皂化價的測定
實驗1―4 酸價的測定
實驗1―5 蛋白質的測定(凱氏定氮法)
實驗1―6 2，6-二氯酚靛酚法測定維生素C的含量
實驗1―7 碘量法測定維生素C的含量
實驗1―8 血糖定量測定(GOD-PAP法)
實驗1―9 蒽酮比色定糖法
實驗1-10 3，5一二硝基水楊酸法測定還原糖含量
實驗1―11 血清膽固醇的定量測定(磷硫鐵法)
實驗1―12 血清總膽固醇的測定(鄰苯二甲醛法)
實驗1―13 雙縮脲法測定蛋白質含量
實驗1―14 Folin試劑法(Lowry法)測定蛋白質含量
實驗1―15 考馬斯亮藍染色法測定蛋白質含量
實驗1―16 紫外吸收法測定蛋白質含量
實驗1―17 紫外吸收法測定核酸含量
實驗1―18 二苯胺顯色法測定DNA含量
實驗1―19 地衣酚顯色法測定RNA含量
實驗1―20 熒光法測定維生素B2含量
實驗1―21 血清丙氨酸氨基移換酶(ALT)的測定
實驗l一22 酸性磷酸酯酶的測定
第二章 提取、沉淀和離心分離技術
第一節 提取技術
一、材料的選擇與處理
二、細胞的破碎
三、抽提
第二節 沉淀分離技術
一、蛋白質的沉淀分離
二、核酸的提取與沉淀分離
三、多糖的提取和分離
四、小分子活性成分的提取和分離
第三節 膜分離技術
一、膜分離技術的分類
二、膜的分類
三、膜的使用壽命
四、透析
五、微濾、超濾和反滲透
第四節 提取物的濃縮、結晶和干燥
一、濃縮
二、結晶
三、干燥
第五節 離心分離技術
一、離心機的種類與用途
二、離心分離方法的選擇
三、離心條件的確定
四、離心操作的注意事項
實驗2一1 香菇多糖的制備
實驗2―2 卵磷脂的制備
實驗2―3 大蒜SOD的提取與分離
實驗2―4 菜花(花椰菜)中核酸的分離和鑒定
實驗2―5 酵母RNA的提取與分離
實驗2―6 從肝臟中提取DNA
第三章 層析技術
第一節 吸附層析
一、吸附柱層析
二、大孔吸附樹脂和聚酰胺柱層析
三、聚酰胺薄膜層析
第二節 分配層析
一、概述
二、紙層析
第三節 凝膠層析
一、基本原理
二、凝膠的選擇
三、操作
第四節 離子交換層析
一、基本原理
二、離子交換劑
三、操作
第五節 親和層析
一、配基與偶聯凝膠的選擇與處理
二、親和層析的操作條件
第六節 薄層層析
一、支持劑的選擇與處理
二、薄層板的制作
三、層析方法
第七節 氣相色譜
一、基本原理
二、氣相色譜的氣路系統
三、色譜柱
四、檢測器
五、定性和定量方法
第八節 高效液相色譜
一、概述
二、HPLC的特點
三、HPLC的分類
四、HPLC的儀器構成
五、定性定量方法
實驗3―1氨基酸的紙層析
實驗3―2微晶纖維素薄板層析法分離氨基酸
實驗3―3核苷酸的離子交換層析
實驗3―4 DNS一氨基酸的聚酰胺薄膜層析
實驗3―5凝膠層析測定蛋白質的Mr
實驗3―6胰蛋白酶的親和層析
實驗3―7 HPLC法測定生物類黃酮含量
實驗3―8 HPLC法測定維生素A含量
第四章 電泳技術
第一節 基本原理
一、泳動度
二、影響泳動度的因素
第二節 乙酸纖維素薄膜電泳
第三節 瓊脂糖凝膠電泳
一、瓊脂糖凝膠的特點
二、DNA的瓊脂糖凝膠電泳
三、印跡轉移電泳
四、交變脈沖電場凝膠電泳
第四節 聚丙烯酰胺凝膠電泳
一、聚丙烯酰胺凝膠的特點
二、凝膠聚合的原理及有關特性
三、PAGE原理
四、SDS-PAGE原理
五、聚丙烯酰胺凝膠等電聚焦電泳原理
六、聚丙烯酰胺凝膠雙向電泳原理
第五節 高效毛細管電泳
一、基本原理
二、實驗方法
三、分離類型及應用
第六節 免疫分析技術
一、抗體的性質和制備
二、抗原抗體反應
實驗4―1 血清蛋白的乙酸纖維素薄膜電泳
實驗4―2 垂直板PAGE分離血清蛋白
實驗4―3 SDS―PAGE測定蛋白質的相對分子質量
實驗4―4 等電聚焦電泳測定血清蛋白質等電點
實驗4―5 DNA的瓊脂糖凝膠電泳
實驗4―6 PAGE分離RNA
實驗4―7 對流免疫電泳法測定胎兒甲種球蛋白
實驗4―8 火箭免疫電泳法測定抗原含量
第五章 分子生物學基本技術
第一節 DNA的體外合成
一、DNA的化學合成
二、聚合酶鏈反應技術
第二節 核酸的分子雜交
一、探針的種類與選擇
二、標記物的選擇
三、探針的放射性同位素標記
四、探針的非放射性標記
五、膜上印跡雜交的條件選擇
六、雜交信號的檢測
七、DNA芯片技術及應用
第三節 基因克隆
一、目的基因的來源
二、常用的克隆載體
三、DNA分子的體外連接
四、重組子導入受體細胞
五、重組子的篩選
六、基因組文庫的構建
七、cDNA文庫的構建
第四節 基因表達
一、原核生物的表達載體
二、用于原核細胞表達的外源基因
三、提高表達水平的措施
四、外源基因在酵母細胞中的表達
五、外源基因在昆蟲桿狀病毒中的表達
六、外源基因在哺乳動物細胞中的表達
第五節 轉基因植物和轉基因動物
一、轉基因植物
二、轉基因動物
第六節 核酸的序列測定
一、鏈終止法
二、新一代高通量測序技術
實驗5―1 植物基因組DNA的提取
實驗5―2 動物基因組DNA的提取
實驗5―3 細菌基因組DNA的提取
實驗5―4 質粒DNA的提取
實驗5―5 聚合酶鏈式反應(PCR)
實驗5―6 質粒DNA的酶切及電泳鑒定
實驗5―7 DNA重組
實驗5―8 大腸桿菌的轉化
實驗5―9 外源基因在大腸桿菌中的誘導表達
第六章 綜合性實驗和設計性實驗
實驗6―1 超氧化物歧化酶的分離純化和同工酶分析
實驗6―2 蛋白質印跡分析
實驗6―3 蛋白質的雙向凝膠電泳
附錄一 實驗數據的處理
附錄二 調整硫酸銨溶液飽和度計算表(25℃)
附錄三 常見生化物質電泳后的染色方法
附錄四 常用緩沖液的配制
參考書目
書摘/試閱
實際上熒光物質的激發光譜就是它的吸收光譜。激發光譜中最高峰處的波長能使熒光物質發射出最強的熒光，如果保持激發光的波長和強度不變，讓物質所發射的熒光通過單色器照射到檢測器上，依次調節單色器至各種波長，并測出相應的熒光強度，然后以熒光強度為縱坐標，以相應的熒光波長為橫坐標作圖，所得曲線稱為該熒光物質的熒光發射光譜，簡稱熒光光譜（fluorescence spectrum）。在建立熒光分析方法時，須根據熒光光譜來選擇適當的測定波長。激發光譜和熒光光譜是熒光物質定性的依據。
對于某一熒光物質的稀溶液，在一定波長和一定強度的入射光照射下，當液層的厚度不變時，所發生的熒光強度和該溶液的濃度成正比，這是熒光定量分析的基礎。
二、熒光儀的主要部件
測定熒光可用熒光計和熒光分光光度計。前者結構簡單，價格較便宜；后者構造精細，不僅定量測定的靈敏度和選擇性高，還可作熒光物質的定性鑒定，應用較廣泛。但二者的基本儀器結構是相似的。由光源發出的光，經單色器讓特征波長的激發光通過，照射到液槽使熒光物質發射出熒光，、經第二個單色器讓待測物所產生的特征波長熒光通過，照射到檢測器產生光電流，經放大后以指針指示或用記錄儀記錄其信號。儀器的主要部件如下。
（1）光源理想的光源應能發出含有各種波長的紫外光和可見光，光的強度須足夠大，并且在整個波段內強度須一致。但理想的光源不易得到，目前應用較多的光源是溴鎢燈和汞蒸氣燈，也有用氙弧燈，它發出的光波強度大。
（2）單色器 測定熒光的儀器須有兩個單色器。第一單色器放在光源和液槽之間，其作用是濾去非特征波長的激發光；第二單色器放在液槽和檢測器之間，以濾去反射光、散射光和雜質熒光，讓特征波長的熒光通過。熒光計采用濾光片作單色器，分光性能較差；熒光分光光度計采用石英棱鏡或光柵作單色器，分光能力強，從而提高了分析的靈敏度和選擇性。為防止透射光對熒光強度的干擾，第二單色器和檢測器與光源呈90°分布。
（3）液槽液槽用來裝溶液。由于普通玻璃會吸收323 nm以下的光，故常用石英制成，且四面均為透光面。
（4）檢測器熒光計用光電池或光電管作檢測器；熒光分光光度計則用光電倍增管作檢測器。
熒光計和熒光分光光度計的操作方法與紫外～可見分光光度計相似，只有3點區別：①需要分別選擇激發光波長和熒光波長。②比色池的四個面均為透光面，比色池架一次只能放一個比色池。測定時，比色池的四個透光面均要擦凈。③為防止長時間光照對熒光強度造成的影響，只在需要讀數時短時間打開光路。
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