生物化學實驗教程（簡體書）

《普通高等教育“十二五”規劃教材．生物科學專業6+x簡明教程系列：生物化學實驗教程》介紹了生物化學研究中重要的實驗技術原理，包括紙層析技術、薄層層析技術、離子交換層析技術、凝膠過濾層析技術、分光光度技術、電泳技術、蛋白質免疫印跡技術等。在介紹了每一種實驗技術原理之後，都列舉了數個應用該技術解決實際研究問題的基礎實驗，內容豐富，不同學校不同專業可根據實際情況進行選做。另外，本書還增加了以蛋白質、酶、多糖和核酸等生物大分子的提取、純化、定量、活性測定等為研究內容的綜合性實驗，每一個綜合性實驗涵蓋了多種生物化學實驗技術，能培養學生對所學知識的綜合運用能力和創新實踐能力。
《普通高等教育“十二五”規劃教材．生物科學專業6+x簡明教程系列：生物化學實驗教程》可作為綜合性、農林、師範等高等院校生物科學類相關專業本科生實驗教材，也可作為從事生命科學教學與研究人員的參考書。．

《普通高等教育"十二五"系列教材?生物科學專業6+X簡明教程系列?配套實驗教材:生物化學實驗教程》可作為綜合性、農林、師范等高等院校生物科學類相關專業本科生實驗教材，也可作為從事生命科學教學與研究人員的參考書。

前言
第一篇實驗要求
第一章生物化學實驗基本要求
第一節生化實驗室學生實驗守則
第二節實驗室安全及防護知識
第三節生物化學實驗報告

第二篇實驗技術原理與基礎實驗
第二章生物物質的定性鑒定
第一節氨基酸和蛋白質的結構及性質
第二節核酸的結構組成特點
第三節糖的基本性質
第四節酶的催化特性
第五節實驗部分
實驗一蛋白質的雙縮脲反應
實驗二蛋白質和氨基酸的茚三酮反應
實驗三蛋白質的黃色反應
實驗四蛋白質的沉澱反應
實驗五蛋白質的兩性性質及等電點的測定
實驗六酵母RNA的提取與鑒定
實驗七糖的呈色反應及還原糖的檢測
實驗八α-澱粉酶的激活劑、抑制劑及其特異性分析
實驗九肌糖原的酵解作用研究
實驗十生物氧化作用研究
第三章紙層析技術
第一節紙層析基本原理
第二節影響相對遷移率的主要因素
第三節實驗部分
實驗一氨基酸的紙層析分離
實驗二紙層析法檢測穀丙轉氨酶活性
第四章薄層層析技術
第一節薄層層析原理
第二節固定相支持介質的選擇
第三節實驗部分
實驗一矽膠薄層層析法分離鑒定水果中的糖類物質
實驗二DEAE-纖維素薄層層析分離鑒定核苷酸
第五章離子交換層析技術
第一節離子交換層析原理
第二節核酸蛋白質檢測儀的構造及使用
第三節實驗部分
實驗一離子交換法製備無離子水
實驗二DEAE-Cellulose柱層析分離純化大蒜超氧化物歧化酶
第六章凝膠過濾層析技術
第一節凝膠過濾層析原理
第二節實驗部分
實驗一分子篩過濾層析脫鹽
實驗二分子篩層析法分離蛋白質及相對分子質量測定
第七章親和層析技術
第八章離心技術
第九章分光光度技術
第一節分光光度技術的原理
第二節分光光度計的構造及使用
第三節實驗部分
實驗一雙縮脲法測定蛋白質含量
實驗二Folin-酚試劑法測定蛋白質濃度
實驗三紫外吸收法測定蚯蚓提取液的蛋白質含量
實驗四考馬斯亮藍染色法測定蛋白質濃度
實驗五花椰菜DNA的提取與二苯胺法測定DNA的含量
實驗六植物組織中可溶性糖含量的測定（蒽酮比色法）
實驗七兔肝轉氨酶活力測定
實驗八酵母發酵過程中無機磷的利用（定磷法）
第十章電泳技術
第一節電泳的基本原理
第二節電泳的分類
第三節常用的電泳技術
第四節染色方法
第五節電泳有關的儀器及使用
第六節實驗部分
實驗一醋酸纖維素薄膜電泳分離血清蛋白
實驗二聚丙烯醯胺凝膠電泳分離大蒜超氧化物歧化酶
實驗三SDS-聚丙烯醯胺凝膠電泳測定超氧化物歧化酶的相對分子質量
實驗四等電聚焦電泳法測定雞卵類黏蛋白的等電點
第十一章蛋白質免疫印跡技術
第一節蛋白質免疫印跡技術原理
第二節抗血清的製備
第十二章滴定技術
第一節概述
第二節實驗部分
實驗一溫度、pH對糖化酶活力的影響
實驗二果蔬中維生素C的定量測定（2，6-二氯酚靛酚滴定法）

第三篇綜合性實驗
第十三章實驗舉例
實驗一微量凱氏定氮法測定牛奶蛋白質含量
實驗二雞卵類黏蛋白的分離純化、活性及相對分子質量測定
實驗三蛋白質免疫印跡檢測小鼠肝臟、脾臟及血液超氧化物歧化酶
實驗四胰蛋白酶米氏常數及最大反應速度的測定
實驗五胰蛋白酶的固定化及其性質
實驗六親和層析純化蚯蚓絲氨酸蛋白酶
實驗七植物過氧化物同工酶提取、活性測定及電泳鑒定
實驗八大豆多糖的提取及測定
實驗九定磷法測定酵母核糖核酸的含量
實驗十小鼠肝臟DNA的提取及測定
實驗十一兔肝總RNA的提取及RT-PCR
參考文獻
附錄一常用標準溶液的配製和標定
附錄二常用緩衝液的配製方法
附錄三硫酸銨飽和度的調整用表
附錄四柱層析材料． More

【操作步驟】
（一）糖的呈色反應
1.Molisch反應
取6支試管編號，分別加入1滴各種糖液（本實驗用阿拉伯糖濃度為10g／L）和2滴Molisch試劑，搖勻，傾斜試管，慢慢加入1mL濃硫酸，小心豎直試管。注意：不要搖動試管，使糖液和硫酸分層，觀察交界處顏色變化。
2.蒽酮反應
取6支試管編號，分別加入1mL蒽酮溶液及各種糖液4滴（本實驗用阿拉伯糖濃度為10g／L），混勻，觀察顏色變化。
3.Seliwanoff反應
取6支試管編號，分別加入1mL Seliwanoff試劑及各種糖液4滴（本實驗用阿拉伯糖濃度為20g／L），混勻，一起放人沸水浴中，比較各管顏色變化及出現顏色的先后順序。
4.Bial反應
取6支試管編號，分別加入1mL Bial試劑及各種糖液2滴（本實驗用阿拉伯糖濃度為10g／L），混勻，一起放人沸水浴中，觀察各管顏色變化的過程。
（二）還原糖的測定
1.Fehling反應
取6支試管編號，分別加入1mL Fehling試劑A和1mL Fehling試劑B，混勻，再分別加入各種糖液4滴（本實驗用阿拉伯糖濃度為20g／L），混勻，沸水浴2～3min，冷卻，觀察沉淀和顏色變化。
2.Benedict反應
取6支試管編號，分別加入2mL Benedict試劑及各種糖液4滴（本實驗用阿拉伯糖濃度為20g／L），沸水浴3～5min，比較各管顏色變化過程。
3.Barfoed反應
取6支試管編號，分別加入1mL Barfoed試劑及各種糖液4滴（本實驗用阿拉伯糖濃度為20g／L），沸水浴3～5min，觀察各管顏色變化，繼續沸水浴20min，比較各管顏色變化及順序。
【結果與分析】
如實記錄本實驗所用糖液的幾種呈色反應快慢及顏色深淺和沉淀多少，結合實驗原理，分析實驗現象及原因。
【注意事項】
1.Molisch反應非常靈敏，10mg／L葡萄糖或1mg／L蔗糖即能呈現陽性反應。過濃的果糖溶液，由于硫酸的焦化作用，將呈現紅色及褐色而不呈紫色，需稀釋糖液濃度。
2.果糖的Seliwanoff反應十分迅速，呈鮮紅色，而葡萄糖所需時間長，且只能產生黃色至淡紅色。戊糖亦與Seliwanoff試劑反應，戊糖經酸脫水生成糠醛，與間苯二酚縮合生成綠色至藍色產物。
3.Bial反應中，如果遇到未知糖呈色不明顯，可用3倍體積水稀釋，并加人1mL戊醇，搖動，若醇液呈藍綠色，即為陽性反應。 More